[发明专利]一种细胞冻存与复苏的方法及其制备的细胞制剂

摘要

本发明公开了一种细胞冻存与复苏的方法及其制备的细胞制剂，将一份单个核细胞分别以单个核细胞与初步诱导的未成熟DC细胞方式于-196℃液氮冻存的方法，以及将冻存的单个核细胞复苏并直接诱导为CIK、将冻存的未成熟的DC细胞复苏并诱导为成熟DC细胞的方法，既能避免每次采集的单个核细胞浪费，保证细胞的活性、数量等指标，又能满足DC-CIK细胞治疗临床应用与规模化储存服务。

主权项

一种细胞冻存与复苏的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.冻存步骤(1)离心分离外周血单个核细胞使其数量级达到10⁹以上，并按照一定比例分装到第一离心管和第二离心管；(2)配制单个核细胞冻存液并加入到第一离心管，程控降温后放入‑80℃冰箱；(3)将淋巴细胞培养基加入到第二离心管，混匀后将其转移到T‑175培养瓶中并继续加入淋巴细胞培养基、DC细胞诱导细胞因子GM‑CSF、IL‑4，CO₂细胞培养箱中诱导培养；(4)将步骤(2)获得的DC细胞在‑20℃冰袋放置9～11min后拍打至细胞全部悬浮，并转移到离心管离心；(5)配制DC细胞冻存液，并加入到第二离心管混匀、分装，程控降温后放入‑80℃冰箱；(6)将冻存24～48h的单个核细胞、DC细胞转移至‑196℃液氮灌保存；B.复苏步骤(7)将液氮冻存的单个核细胞复苏后转移到T‑175培养瓶，并按照一定比例添加CIK细胞诱导培养基，于CO₂培养箱培养；(8)将液氮冻存的DC细胞复苏后转移到T‑175培养瓶，并按照一定比例添加DC细胞诱导培养基，于CO₂培养箱培养，并与复苏后的DC细胞混合。