[发明专利]利用口腔上皮细胞制作单细胞测序参考品的方法

摘要

本发明涉及利用口腔上皮细胞制作单细胞测序参考品的方法，包括以下步骤：a)刮取口腔上皮细胞，保存在PBS中；b)在显微镜下，用毛细口吸管吸取单个口腔上皮细胞；c)单细胞全基因组扩增，扩增后用磁珠法纯化；d)对扩增样本进行酶切，用EDTA终止实验，磁珠法纯化；e)Proton文库构建；f)Proton半导体高通量测序平台进行上机测序；g)测序数据分析。本发明提供了一种单细胞相关研究的标准品制备新途径，具有取材简单、操作方便、快捷、高分辨率的特点，适用于PGS、肿瘤早期筛查等项目。

主权项

利用口腔上皮细胞制作单细胞测序参考品的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)口腔上皮细胞获得、保存：刮取口腔上皮细胞，保存在PBS溶液中；b)分离单个口腔上皮细胞：在显微镜下，用毛细口吸管吸取单个口腔上皮细胞；c)单细胞全基因组扩增：对单细胞样本进行全基因组扩增，扩增后的样本用磁珠法纯化DNA；d)DNA片段化：对扩增样本进行酶切，用EDTA终止实验，然后用磁珠法纯化酶切产物；e)Proton文库构建：用DNA酶切后的产物进行文库构建，DNA片段末端补平后纯化，两端加特异性接头后纯化，PCR扩增后纯化；f)Proton半导体高通量测序平台进行上机测序：计算文库的稀释倍数，利用乳液PCR技术形成达到测序要求的阳性测序模板，利用半导体测序系统对测序模板进行测序，最终获得每个DNA片段的碱基序列；g)测序数据分析：将测序结果利用生物信息学分析把这些序列定位到人类基因组参考图谱上，通过与参考基因组的对比分析样本的信息。