[发明专利]利用大肠杆菌表达系统获得可溶性胰岛素原的方法在审
| 申请号： | 201410750077.0 | 申请日： | 2014-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN104388458A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 毕玉平;边斐;张晓玮;彭振英;郑玲;陈高;于金慧 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/17;C07K14/62 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 于晓晓 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用大肠杆菌表达系统获得可溶性胰岛素原的方法。本发明通过TrxA-PI融合表达载体的构建、对大肠杆菌表达菌株的选择、诱导条件的优化以及重组蛋白的提取纯化等各方面的改进能够有效提高可溶性胰岛素原的表达，降低生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 大肠杆菌 表达 系统 获得 可溶性 胰岛素 方法 | ||
【主权项】：
一种利用大肠杆菌表达系统获得可溶性胰岛素原的方法，其特征在于，（1）对人源PI基因进行了密码子优化，合成了经过密码子优化的基因；（2）设计引物，PCR扩增后，将经过密码子优化的基因融合TrxA蛋白构建融合表达载体；（3）转入大肠埃希氏菌NKYBYP表达菌株，发酵； （4）将发酵后的菌体超声破碎，分离纯化上清液中TrxA‑PI融合蛋白； （5）融合蛋白经肠激酶酶切、亲和层析纯化后获得PI纯品。
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