[发明专利]一种用于肺癌检测的RBM5FISH探针的制备方法

摘要

本发明提供一种用于肺癌检测的RBM5 FISH探针的制备方法，该RBM5 FISH探针可用于肺癌早期诊断，与现有的分子探针联用可显著提高诊断的准确率，适用于多种类型的检测样本，如石蜡切片、细胞滴片、细胞涂片、痰细胞，可适用于多种临床样本的检测。本发明可制备成试剂盒，实现在肿瘤生物学、细胞遗传学等领域的应用，有助于综合评价各分子标志物与肺癌发生发展的联系。

主权项

一种用于肺癌检测的RBM5 FISH探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：步骤一、克隆的筛选：通过NCBI Mapview数据库检索所有含有RBM5基因的克隆，并对这些克隆进行筛选，选择出最优的克隆；按照筛选出的最优克隆编号购买克隆Life Technology RPCI11.C；步骤二、克隆的培养：用牙签挑取克隆RPCI11.C，在含25μg/ml氯霉素的LB固体培养基上划线，将划线后的LB固体培养基37℃静止培养16‑24h获得RPCI11.C单菌落；挑取RPCI11.C单菌落转入5ml含25μg/ml氯霉素的LB液体培养基中，37℃220rpm/min培养8‑12h；取0.5‑1ml上述培养液转入100ml含25μg/ml氯霉素的LB液体培养基中，37℃220rpm/min培养16‑24h得到克隆培养液；步骤三、RBM5基因的提取：收集步骤二得到的克隆培养液，3000rpm/min离心10min；取沉淀，应用质粒DNA提取试剂盒提取RBM5基因；使用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测所提取的RBM5基因的浓度和纯度；步骤四、RBM5基因的鉴定：针对RBM5基因使用上游引物和下游引物进行PCR扩增，并通过1％糖凝胶电泳对扩增产物片段进行分析，以完成RBM5基因的鉴定；步骤五、RBM5探针的制备：应用缺口平移法对RBM5基因进行荧光标记，对标记物进行乙醇沉淀获得RBM5探针，避光、‑20℃储存；步骤六、RBM5探针的验证：使用人肺癌组织检测样本进行探针验证。