[发明专利]黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统及其应用

摘要

本发明提供一种黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统CMV‑ZMBJ VIGS，以分离自田间自然侵染玉米的CMV‑ZMBJ分离物病毒粒子RNA为材料，经RT‑PCR扩增其基因组RNA1、RNA2和RNA3的全长cDNA，连入pCass‑Rz等植物双元表达载体，经转化农杆菌后具有侵染性，成功构建得到CMV‑ZMBJ侵染性cDNA克隆pCMV101、pCMV201和pCMV301。本发明构建的CMV‑ZMBJ VIGS系统适用于多种植物基因功能的研究，仅需要将待研究植物基因的部分片段插入载体即可用于基因的沉默，本发明方法简便、快速、高效、低成本、不需遗传转化。另外，CMV‑ZMBJ VIGS载体可用于玉米基因功能的研究，比现在常用于玉米基因功能研究的BMV VIGS载体适用寄主范围更广泛，不仅适用于Va35，也适用于B73、郑58、Mo17等玉米。

主权项

黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默系统，其特征在于，由质粒pCMV2‑2bN81‑A、质粒pCMV101和质粒pCMV301组成；其中，质粒pCMV101是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA1为模板，经RT‑PCR获得全长cDNA，然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到的；质粒pCMV301是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA3为模板，经RT‑PCR获得全长cDNA，然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到的；质粒pCMV2‑2bN81‑A是以侵染玉米的黄瓜花叶病毒分离物CMV‑ZMBJ的RNA2为模板，经RT‑PCR获得全长cDNA，然后克隆至pCass‑Rz载体上构建得到质粒pCMV201，并将质粒pCMV201中第2659‑2752位核苷酸改造为多克隆位点，改造后的pCMV201命名为pCMV201‑2bN81‑A；质粒pCMV2‑2bN81‑A、质粒pCMV101和质粒pCMV301的核苷酸序列分别如Seq ID No.1‑3所示。