[发明专利]一种沙门氏菌的四重PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种沙门氏菌的四重PCR检测方法。本发明中将hns基因(152bp)、fliM基因(418bp)、invA基因(681bp)和Hut基因(495bp)，作为PCR检测的四个基因靶点，将扩增这4个基因片段的4对引物放在一个PCR反应体系，通过各项参数调整优化，建立直接从样品中检测沙门氏菌的四重PCR检测方法。与传统PCR不同，本发明建立的快速检测沙门氏菌四重PCR体系，同时扩增沙门氏菌的四个毒力因子特异性序列，一方面具有四重保险的特点，提高检测的准确性和可靠性，另一方面还可以对其毒力因子编码基因结构变异进行分析，从而掌握其变异趋势，起到一箭双雕的效果。

主权项

一种沙门氏菌的四重PCR检测方法，其特征在于，将沙门氏菌编码DNA结合蛋白的hns基因，编码鞭毛开关蛋白的fliM基因，沙门氏菌入侵肠道上皮细胞有关的invA基因和编码组氨酸结合周质蛋白的Hut基因作为4个基因靶点，采用四重PCR于PCR反应体系中一次性同时扩增上述4个基因片段，再通过琼脂糖凝胶电泳检测鉴定PCR扩增产物；其中：扩增hns基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；扩增fliM基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示；扩增invA基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.5所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.6所示；扩增Hut基因的上游引物的序列如SEQ ID NO.7所示；下游引物的序列如SEQ ID NO.8所示。