[发明专利]一种骨质疏松斑马鱼模型的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201410515404.4 | 申请日： | 2014-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN104313043B | 公开（公告）日： | 2017-03-29 |
| 发明（设计）人： | 张晶晶;黄洪新;萧崇德;曾荣 | 申请（专利权）人： | 广东医学院附属医院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;A01K67/027;A61K31/573;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京万慧达知识产权代理有限公司11111 | 代理人： | 张金芝,杨颖 |
| 地址： | 524001 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种骨质疏松斑马鱼模型的构建方法及其应用。本发明通过应用tol2‑gateway技术，在获得成骨细胞特异性转录因子的启动子后，构建出骨骼报告绿色荧光的转基因斑马鱼，并用该品系斑马鱼建造糖皮质激素诱导的骨质疏松斑马鱼模型，同时应用壮骨补肾中药淫羊藿总黄酮对其进行评估。采用本发明的方法构建的骨质疏松模型方便、可行、有效，与传统的化学染色方法相比更加稳定、省时、高效，适合抗骨质疏松药物的高通量筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 骨质 疏松 斑马 模型 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种骨质疏松斑马鱼模型的构建方法，其包括以下步骤：(1)斑马鱼的繁殖；(2)转基因斑马鱼的构建；(3)采用药物对转基因斑马鱼进行造模；其特征在于，在步骤(2)所述的转基因斑马鱼的构建过程中，应用tol2‑gateway转基因技术分别构建质粒5’Entry clone:p5E‑Osterix，Middle Entry clone:pME‑nls EGFP和3’Entry clone:p3E‑Poly A，并将上述质粒进行三片段LR反应，获得表达质粒pDestTol2CG2‑osterix‑nls‑EGFP‑pA，最后将所述表达质粒与Tol2mRNA混合，显微注射到斑马鱼胚胎细胞中；其中步骤(2)中所述的表达质粒pDestTol2CG2‑osterix‑nls‑EGFP‑pA的结构如图1所示；其中步骤(3)中所采用的药物为地塞米松DEX，其最佳浓度为10μM。
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