[发明专利]一种定量快速筛选抑制黄曲霉毒素产生的活性物质的方法

摘要

本发明涉及一种定量快速筛选抑制黄曲霉毒素的活性物质的方法，将一定质量或浓度的微生物发酵产物、植物提取物、天然产物、或化学合成产物加入到液体培养基，取200-500微升加到微量液体培养器，以空白培养液为对照，接种5-10微升寄生曲霉DM菌株的孢子液，28度培养3-6天，目测DM菌株菌丝生长和橘红色降散盘衣酸的产生，将目测有抑制效果的微量液体培养器于1000rpm离心1分钟，称量菌丝体鲜重，将菌丝体置入甲醇/氢氧化钠溶液中，提取其中的降散盘衣酸30-40分钟，于560nm处测量处理和对照提取液的吸光值，计算抑毒率和抑菌率，选择抑制率在90-100%的处理为抑制黄曲霉毒素产生的活性物质。本发明可实现微量、直观、快速、安全、低成本筛选高效抑制黄曲霉毒素的活性物质。

主权项

一种定量快速筛选抑制黄曲霉毒素产生的活性物质的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）所使用的黄曲霉毒素指示菌株为寄生曲霉DM菌株；（2）所使用的液体培养基配方组成为酵母粉10g，蔗糖50g，去离子水1000mL；（3）将一定质量或浓度的微生物发酵产物、植物提取物、天然产物、或化学合成产物，加入上述液体培养基中，混匀后取200‑500微升加入到微量液体培养器中作为处理组，同时取200‑500微升空白培养液加入到另一微量液体培养器中作为对照组；（4）向微量液体培养器中无菌操作接入5‑10微升寄生曲霉DM菌株的分生孢子悬液，在28度恒温培养箱中培养3‑6天后，观测培养结果；（5）目测处理组和对照组的寄生曲霉DM菌株的菌丝生长和橘红色降散盘衣酸的产生状况，凡是能抑制DM菌株菌丝中橘红色降散盘衣酸的产生和/或菌丝生长的处理组，即含有能抑制黄曲霉毒素产生的活性物质；（6）定量测定抑毒率和抑菌率，将目测有抑制效果的微量液体培养器置入离心机中，在1000转/分下离心1分钟后，称量处理组和对照组的菌丝体鲜重，计算抑菌率；然后，将菌丝体置入甲醇/氢氧化钠（体积重量比为9：1）溶液中，提取菌丝体中的橘红色降散盘衣酸30‑40分钟，在分光光度计中于560nm处测量处理组和对照组的提取液的吸光值，计算抑毒率；（7）根据抑毒率和/或抑菌率的计算结果，选择抑制率在90‑100%的处理组为具有显著抑制黄曲霉毒素产生的活性物质。