[发明专利]重组酰胺酶Dt‑Ami2、编码基因、载体、工程菌及应用有效
| 申请号： | 201410481925.2 | 申请日： | 2014-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN104293752B | 公开（公告）日： | 2017-07-28 |
| 发明（设计）人： | 郑裕国;吴哲明;郑仁朝;沈寅初 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/80 | 分类号： | C12N9/80;C12N15/55;C12N15/74;C12N1/21;C12P7/52;C12P7/40;C12P7/44;C12P7/42;C12P13/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司33201 | 代理人： | 黄美娟,李世玉 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组酰胺酶Dt‑Ami 2、编码基因、载体、工程菌及应用，本发明提供了一种来源于代尔夫特菌Delftia tsuruhatensis CCTCC No.M 205115的酰胺酶基因及其编码的重组酰胺酶WB；该酰胺酶基因可与表达载体连接构建得到含该基因的胞内表达重组质粒，转化至大肠杆菌菌株中，获得重组大肠杆菌，该重组大肠杆菌含有重组酰胺酶，可以利用重组酰胺酶为催化剂催化系列酰胺化合物的水解。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 酰胺酶 dt ami 编码 基因 载体 工程 应用 | ||
【主权项】：
一种重组酰胺酶Dt‑Ami 2在水解酰胺制备羧酸中的应用，其特征在于所述的应用为：将含重组酰胺酶Dt‑Ami 2基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH 8.0Tris‑HCl缓冲液悬浮后进行超声破碎，取上清液提取纯酶作为催化剂，以式(Ⅰ)所示化合物、式(Ⅱ)所示化合物、2,2‑二甲基环丙甲酰胺、色氨酰胺或2‑氨基‑4‑甲硫基丁酰胺为底物，以pH 6～9的Tris‑HCl缓冲液为反应介质构成反应体系，在25～45℃下进行水解反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得羧酸产物；所述酰胺酶Dt‑Ami 2的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示；式(Ⅰ)中R1为C1～C4烷基，R2为氢、羟基或甲基；式(Ⅱ)中R3为苯基、苄基、对羟基苄基或苯乙基。
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