[发明专利]胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法

摘要

本发明涉及基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法。本发明是通过荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链中的肽链将硅纳米线和荧光团共价连接在一起构建而成胰蛋白酶荧光化学传感器。本发明的胰蛋白酶荧光化学传感器可用于含有胰蛋白酶的溶液体系中的胰蛋白酶的检测。当检测体系中不存在胰蛋白酶时，硅纳米线与其表面荧光团之间的能量转移使荧光团的荧光猝灭；当检测体系中有胰蛋白酶存在时，由于胰蛋白酶的加入切断了肽链，改变了硅纳米线与荧光团之间的距离，抑制了硅纳米线与荧光团之间的能量转移，使检测体系中的荧光恢复。根据荧光强度的变化，实现对检测体系中是否含胰蛋白酶的检测。

主权项

一种基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器的制备方法，其特征是，所述的制备方法包括以下步骤：1)室温下，将硅纳米线浸泡在质量浓度为1％～5％的氢氟酸水溶液中，取出硅纳米线并用去离子水清洗干净，得到表面具有Si‑H键的硅纳米线；将得到的表面具有Si‑H键的硅纳米线浸泡于除氧的0.025～1g/mL叔丁氧基N‑氨基甲酸丙烯的无水乙醇或无水甲醇溶液中，在500W的汞灯下光照1～6小时，收集硅纳米线，反复用有机溶剂清洗后浸泡于三氟乙酸：甲醇的体积比为1:1～1:8的三氟乙酸甲醇溶液中1～4小时，得到表面修饰有氨基的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；2)将步骤1)清洗后得到的表面修饰有氨基的硅纳米线浸泡于浓度为0.01～1M的对苯二异硫氰酸酯的乙醇溶液中，在温度为30～50℃下浸泡30分钟～2小时后，得到表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线，收集并用有机溶剂反复清洗；3)将步骤2)清洗后得到的表面修饰有异硫氰酸根的硅纳米线浸泡于浓度为0.5～1.5mol/L的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N‑二甲基甲酰胺溶液中，并按照每20mL荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链的N,N‑二甲基甲酰胺溶液加入10～60μL的N,N‑二异丙基乙胺加入N,N‑二异丙基乙胺，室温下搅拌10～24小时后，用有机溶剂反复超声清洗除去未反应的荧光团标记的胰蛋白酶选择性肽链，得到基于硅纳米线与其表面荧光团之间能量转移的胰蛋白酶荧光化学传感器。