[发明专利]一种高纯度的微环DNA及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201410364761.5 | 申请日： | 2014-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN105316314B | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 侯小虎;何成宜;陈志英 | 申请（专利权）人： | 深圳新诺微环生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/63;A61K48/00;C12Q1/6806;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518131 广东省深圳市龙华新区龙华*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高纯度的微环DNA及其制备方法和应用，所述制备方法包括：1)提供含有靶标序列的亲本质粒，所述亲本质粒具有特异性重组位点、骨架DNA的核苷酸序列和微环DNA的核苷酸序列；2)将所述亲本质粒转化到宿主细胞，经诱导后所述亲本质粒通过位点特异性重组作用产生微环DNA和含有靶标序列的骨架DNA；3)裂解宿主细胞，对质粒进行预纯化，得到混合质粒，所述混合质粒中包括微环DNA、含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA；4)采用三螺旋纯化法去除混合质粒中的含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA，得到高纯度的微环DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 靶标 微环 混合质粒 高纯度 制备方法和应用 核苷酸序列 宿主细胞 位点特异性重组 特异性重组 作用产生 三螺旋 预纯化 裂解 位点 去除 制备 诱导 转化 | ||
【主权项】：
1.一种高纯度的微环DNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)提供含有靶标序列的亲本质粒，所述含有靶标序列的亲本质粒具有特异性重组位点、骨架DNA的核苷酸序列和微环DNA的核苷酸序列；所述含有靶标序列的亲本质粒通过所述特异性重组位点的位点特异性重组产生微环DNA和含有靶标序列的骨架DNA；所述靶标序列为双链DNA，所述靶标序列含有与第三条单链相互作用形成三螺旋结构的核苷酸序列，所述微环DNA不含有与所述第三条单链相互作用形成三螺旋结构的核苷酸序列；2)将所述含有靶标序列的亲本质粒转化到宿主细胞，经诱导后所述含有靶标序列的亲本质粒通过特异性重组位点的位点特异性重组作用产生微环DNA和含有靶标序列的骨架DNA；3)裂解宿主细胞，对质粒进行预纯化处理，得到混合质粒，所述混合质粒中包括微环DNA、含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA；4)采用三螺旋纯化法去除所述混合质粒中的含有靶标序列的亲本质粒和/或含有靶标序列的骨架DNA，得到所述高纯度的微环DNA。
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