[发明专利]高效细胞爬片免疫组化方法

摘要

本发明公开了一种高效细胞爬片免疫组化方法，将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿匹配使用，载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述免疫细胞组织化学染色鉴定包括用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补。本发明可进行大规模，多样本的医学实验科学研究。

主权项

一种高效细胞爬片免疫组化方法，将已经过灭菌消毒处理的载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；培养皿设有培养皿盖，其特征是：所述培养皿设有多个相同大小、可放置载玻片的细胞培养槽，每个细胞培养槽中分别放置一片载玻片；所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤： (1)用冰丙酮固定15min或4％多聚甲醛固定； (2)流水漂洗，用PBS清洗标本3次； (3)用0.5％Triton X‑100(PBS配)孵育10min； (4)0.3％H2O2孵育10min； (5)用PBS清洗标本3次后，热风充分干燥； (6)用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并查看，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7)空气充分干燥； (8)用正常二抗血清封闭孵育10min； (9)在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30～60min； (10)吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11)滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30～60min； (12)PBS清洗标本3次； (13)DAB显色，避光，镜下观察； (14)蒸馏水洗； (15)苏木素衬染； (16)盐酸酒精分化，自来水洗； (17)梯度酒席脱水，二甲苯透明； (18)中性树胶封片。