[发明专利]一种DNA转录方向和转录模板的系统检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种DNA转录方向和转录模板的系统检测方法及其应用。该方法主要是利用S1核酸酶能够特异性降解单链DNA的性质检测目的基因的转录方向；以待检基因链特异RT-PCR产物cDNA为模板，利用设计的基因上游引物F或下游引物R进行PCR，根据PCR产物电泳结果判断待检基因的转录模板是DNA的正链还是负链。该方法可用于分析DNA向mRNA转录过程中是单向转录还是双向转录；对于单向转录的DNA片段，能够进一步确定DNA转录的模板链是DNA的正链还是负链。另外，本方法可在12h左右完成检测，具有操作简单、速度快、成本低的显著特点，开发成检测试剂盒，可在科学研究、新基因功能研究中广泛推广应用。

主权项

一种DNA转录方向和转录模板的系统检测方法，其特征在于，步骤如下：S1.提取待检基因总RNA；S2.将步骤S1的RNA反转录为cDNA；S3.设计待检基因的引物F和引物R；S4.利用S1核酸酶酶切步骤S2的cDNA，以酶切产物为模板，利用步骤S3的引物F和引物R进行PCR，根据PCR产物的电泳结果判断待检基因转录产物cDNA是单链还是双链；S5.如果待检基因转录产物cDNA是单链，检测其转录模板是正链或负链的方法如下：S51.去除步骤S1的RNA中的 DNA后，以步骤S3的引物F或引物R进行链特异RT‑PCR，得到反转录产物cDNA；S52.以产物cDNA为模板，利用步骤S3设计的引物F或引物R，进行PCR扩增；S53.步骤S52的PCR产物进行电泳，根据电泳结果判断待检基因的转录模板是DNA的正链还是负链；所述引物F和引物R分别为待检基因DNA双链两端的一段序列，可用于PCR扩增出待检基因序列。