[发明专利]基于Caco-2细胞对纳米氧化锌的生物安全性评价方法

摘要

本发明提供一种基于Caco-2细胞对纳米氧化锌的生物安全性评价方法，包括细胞常规培养、细胞传代、细胞冻存、细胞复苏、将细胞进行染毒处理、进行形态学观察和细胞活性检测等步骤，本发明对于探讨纳米氧化锌的肠道毒性具有一定的理论意义，并为食品用纳米氧化锌限量标准的制定提供参考，为进一步研究食品用纳米氧化锌的安全问题提供可靠的科学依据，为其它纳米材料的安全性评价提供参考。为纳米氧化锌的安全使用提供理论支撑。

主权项

一种基于Caco‑2细胞对纳米氧化锌的生物安全性评价方法，其特征在于包括如下步骤：1）细胞常规培养：将Caco‑2细胞培养于含有2.9 mg/ml L‑谷氨酰胺，1 mg/ml 链霉素，100 unit/ml 青霉素，10% 胎牛血清的DMEM完全培养基，每2天进行细胞换液，取对数期Caco‑2细胞进行实验；2）细胞传代：Caco‑2细胞为贴壁细胞，培养3‑4天后，细胞覆盖瓶底80%‑90%时，采用0.25%胰酶37 ℃消化，镜检观察，待少量细胞悬浮，多数细胞边缘透明时加入新培养基吹吸进行终止消化，混合悬液以1/2—1/3的比例进行分瓶传代；3）细胞冻存：细胞覆盖瓶底80% ‑ 90%，采用胰酶消化成单细胞悬液，2000 rpm离心5分钟，弃上清，缓慢加入冻存液，吹吸混匀，分装到灭菌冻存管中，可放入垫有棉花的泡沫盒中直接‑80℃超低温冰箱过夜，次日转移到液氮中冻存；4）细胞复苏：从液氮中取出冻存细胞，加入10 ml完全培养基混合，2000 rpm 5 min离心，弃上清，再加入10 ml 完全培养液培养，次日换液；5）将细胞进行染毒处理；6）进行形态学观察和细胞活性检测。