[发明专利]高效合成S-腺苷同型半胱氨酸的双酶体系及其应用方法

摘要

本发明涉及生物工程领域；具体涉及分子生物技术、基因工程、酶工程、制药工程等技术领域；更具体涉及极耐热性重组酶的高效表达和酶学定性，以及应用这些酶在高温的反应条件下高效生产S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）的方法。SAH是一类有效的镇静剂和抗病毒因子。本发明的要点包括：（1）发现海栖热袍菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的最适反应条件和最高催化活性，为SAH的酶法生产获得活性和稳定性俱佳的酶种；（2）将SAH合成反应与辅酶再生反应相偶联，建立高效生产SAH的双酶系统与技术；（3）用重组海栖热袍菌乳酸脱氢酶作辅酶再生反应催化剂，实现主体产物的高产低消耗；（4）根据海栖热袍菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的性质建立高效生产SAH的独特的工艺条件。

主权项

一种由海栖热袍菌S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶与催化NAD再生反应的酶共同组成的高效合成S‑腺苷同型半胱氨酸（SAH）的双酶系统，以及应用双酶系统高效合成SAH的方法；技术方案包括以下主要步骤：(1)从海栖热袍菌中克隆出编码S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶等目标基因，并将其插入大肠杆菌表达载体构建基因表达质粒；(2)对表达质粒中的目标基因的序列进行优化，提高其表达水平；(3)用表达质粒转化大肠杆菌获得重组细胞，细胞培养过程中诱导基因表达后，收集并裂解重组细胞，对细胞提取液进行热处理后离心，得到重组酶；(4)在高温条件下，用海栖热袍菌S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶与介导辅酶再生的酶进行联合反应，进行SAH的高效合成。