[发明专利]梅岭霉素合成基因簇中酮还原酶MeiF在手性芳香醇生产中的应用

摘要

本发明公开了一种表达纯化酮还原酶MeiF生物制备手性芳香醇的方法，及其在以芳香酮为底物生物制备手性芳香醇中的应用。以纯化的该酮还原酶和葡萄糖还原酶GDH作为催化剂，在只需要添加NADP+的条件下实现了以芳香酮为底物高效生物制备手性芳香醇。

主权项

1.酮还原酶MeiF以芳香酮为底物生物制备手性芳香醇的方法，其特征在于所述的方法包括：酮还原酶MeiF作为催化剂，以芳香酮为底物，以葡萄糖作为辅底物，以葡萄糖脱氢酶GDH和NADP+提供NADPH生物还原制备芳香手性醇；所述的酮还原酶MeiF的制备方法为将含有meiF基因的表达载体pET28a+meiF导入大肠杆菌中进行诱导表达并利用镍柱进行纯化，所述的酮还原酶MeiF的基因序列为：Atgacccaaacagctggaaaaaccgcactggtgaccggtgcggcgcggccatcgcccgaaggctcgccgccgaaggtgttctggtggccgtgcactacgggcggtgcaaagcggacgcggaggaaacggtcgcgtcgatcgagcaggccggcgggcaggcattcgccatcagggcggaccttgcggccgacgacgccctcgacacgctcttcagcgagctcgcgaccgggctcgccggccggccgctgaacatcctggtgaacaacgccgccatctacgccgacccggacgacccggccgccgcgcaggcggacggctatgtggcgggcatttccgaggtcactcaggaggagttcgaccgtatcttcagcgtcaatgtacgtgccccgtttttcgtcacccaacggtgtctgccgctcctcgccgacggcggacggatcgtcaacatctcttccgccgtcaccaggatcgcctggccgctgctgccctacgccatgagcaagggcgccctcgagatcatggcgcccaggctggccaatgagctgggacaccggggaatcaccgtcaacaccatcgcgccgggcatcaccgacaacaccaaaaccaacacgtggctgcacgatatgcccggggcggccgagggcgtggccgccatgaccgcactgcgccgactcggtcagccgtccgacatcgccgatgtcgtcgccctcctcgcctcggacgaggcccgctgggtcaccggacaactggtcgacgcctccggcggcatggccctggcccccacaccaccgggcatgtag；所述的酮还原酶MeiF以芳香酮为底物生物制备手性芳香醇的方法的反应体系为底物芳香酮0.5mM；Tris buffer 50mM，其中Tris buffer的pH值为7.5；NaCl 100mM；10％甘油；NADP+100μM；D‑葡萄糖200mM；GDH 5μM；酮还原酶MeiF 20μM；水，22度，140rpm反应20小时。