[发明专利]使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法及应用无效
| 申请号： | 201410085883.0 | 申请日： | 2014-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN103837687A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 赵毅;李友海;李健;章方良;蒋忻坡;黄冰;卢世香;裴秀芝;王媛媛;丁会芹 | 申请（专利权）人： | 青岛康立泰药业有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 潍坊正信专利事务所 37216 | 代理人： | 王伟霞 |
| 地址： | 266001 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法及应用，包括以下步骤：（1）从液氮罐取出一支冻存的具有白细胞介素-12受体的细胞，复苏活化培养至对数生长期；（2）使用不同浓度的重组人白细胞介素-12标准品诱导具有白细胞介素-12受体的细胞产生γ干扰素，得到重组人白细胞介素-12标准品浓度值ED50s；（3）使用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白质诱导具有白细胞介素-12受体的细胞产生γ干扰素，得到待测重组人白细胞介素-12蛋白质浓度值ED50r；（4）根据公式Pr=Ps×ED50s/ED50r，得到待测重组人白细胞介素-12蛋白质体外活性Pr。 | ||
| 搜索关键词： | 使用 具有 白细胞 12 受体 细胞 检测 重组 体外 活性 方法 应用 | ||
【主权项】：
使用具有白细胞介素‑12受体的细胞检测重组人白细胞介素‑12体外活性的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）从液氮罐取出一支冻存的具有白细胞介素‑12受体的细胞，将细胞快速融化复苏，在培养基中静置培养传代至对数生长期；（2）使用不同浓度的重组人白细胞介素‑12标准品与步骤（1）得到的具有白细胞介素‑12受体的细胞在培养基中共培养，诱导具有白细胞介素‑12受体的细胞产生γ干扰素，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以重组人白细胞介素‑12标准品的浓度为横坐标，得到S型标准曲线，从S型标准曲线中得到γ干扰素的量的最大值的一半时所对应的重组人白细胞介素‑12标准品的浓度值，该浓度值记作为ED50s；（3）使用不同浓度的待测重组人白细胞介素‑12蛋白质与步骤（1）得到的具有白细胞介素‑12受体的细胞在培养基中共培养，诱导具有白细胞介素‑12受体的细胞产生γ干扰素，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以待测重组人白细胞介素‑12蛋白质的浓度为横坐标，得到S型标准曲线，从S型标准曲线中得到γ干扰素的量的最大值的一半时所对应的待测重组人白细胞介素‑12蛋白质的浓度值，该浓度值记作为ED50r；（4）根据公式Pr=Ps×ED50s/ED50r，计算得到所述待测重组人白细胞介素‑12蛋白质的体外活性Pr,其中Ps为重组人白细胞介素‑12标准品的活性值；所述步骤（2）和步骤（3）同时操作，并使用同源的具有白细胞介素‑12受体的细胞，使用相同的培养条件和相同的操作步骤。
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