[发明专利]使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法及应用

权利要求书

1.使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）从液氮罐取出一支冻存的具有白细胞介素-12受体的细胞，将细胞快速融化复苏，在培养基中静置培养传代至对数生长期；

（2）使用不同浓度的重组人白细胞介素-12标准品与步骤（1）得到的具有白细胞介素-12受体的细胞在培养基中共培养，诱导具有白细胞介素-12受体的细胞产生γ干扰素，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以重组人白细胞介素-12标准品的浓度为横坐标，得到S型标准曲线，从S型标准曲线中得到γ干扰素的量的最大值的一半时所对应的重组人白细胞介素-12标准品的浓度值，该浓度值记作为ED50s；

（3）使用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白质与步骤（1）得到的具有白细胞介素-12受体的细胞在培养基中共培养，诱导具有白细胞介素-12受体的细胞产生γ干扰素，以产生的γ干扰素的量为纵坐标，以待测重组人白细胞介素-12蛋白质的浓度为横坐标，得到S型标准曲线，从S型标准曲线中得到γ干扰素的量的最大值的一半时所对应的待测重组人白细胞介素-12蛋白质的浓度值，该浓度值记作为ED50r；

（4）根据公式Pr=Ps×ED50s/ED50r，计算得到所述待测重组人白细胞介素-12蛋白质的体外活性Pr,其中Ps为重组人白细胞介素-12标准品的活性值；

所述步骤（2）和步骤（3）同时操作，并使用同源的具有白细胞介素-12受体的细胞，使用相同的培养条件和相同的操作步骤。

2.如权利要求1所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：所述具有白细胞介素-12受体的细胞，具有表达人白细胞介素-12的受体β1和β2的能力，能够与人白细胞介素-12结合，并且被诱导产生γ干扰素。

3.如权利要求2所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：所述具有白细胞介素-12受体的细胞，可以是细胞天然就有表达人白细胞介素-12受体β1和β2的能力，也可以是通过人工重组的细胞，具有表达人白细胞介素-12受体β1和β2的能力。

4.如权利要求3所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：所述具有白细胞介素-12受体的细胞是NK92细胞，所述NK92细胞具有天然表达人白细胞介素-12受体β1和β2的能力。

5.如权利要求1所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：步骤（1）、（2）、（3）中，所述培养和共培养均是在温度37℃、二氧化碳体积浓度是5%的环境中培养至对数生长期。

6.如权利要求5所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：步骤（1）、（2）、（3）中，培养至对数生长期时所述具有白细胞介素-12受体的细胞在步骤（1）中的培养基中以及在步骤（2）、（3）中的共培养体系中的密度均为1～5×10⁵个/ml。

7.如权利要求1所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：所述步骤（2）和步骤（3）中重组人白细胞介素-12蛋白标准品和待测重组人白细胞介素-12蛋白质在共培养体系中的浓度为0.032ng/ml～51.2ng/ml，所述诱导具有白细胞介素-12受体的细胞产生γ干扰素的时间为2～120小时。

8.如权利要求1所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：步骤（1）、（2）、（3）中，所述培养基是在MEM培养基中添加β巯基乙醇、叶酸、rhIL-2、马血清和胎牛血清组成的。

9.如权利要求1至8任一权利要求所述的使用具有白细胞介素-12受体的细胞检测重组人白细胞介素-12体外活性的方法，其特征在于：所述步骤（2）和步骤（3）中，产生γ干扰素的检测方法为酶联免疫法，所述酶联免疫法使用的一抗为γ干扰素抗体。

10.使用具有白细胞介素-12受体的细胞在检测重组人白细胞介素-12体外活性中的应用。