[发明专利]一种基于荧光蛋白分布比例的土壤内可利用氮素的检测方法

摘要

本发明的一种基于荧光蛋白分布比例的土壤内可利用氮素的检测方法，是由酿酒酵母菌株细胞自噬相关蛋白Atg8的荧光标记、土壤水萃液的获取、酿酒酵母在营养丰富培养基和不同氮素量培养基的培养、模型的建立和土壤内可利用氮素的推算等步骤组成，其特征在于：不同可利用氮素的量会使得GFP-Atg8在液泡内的分布比例不同，据此建立标准模型和推算未知土壤内可利用氮素的量。该方法操作简单、成本低廉、可真实反映生物对土壤内可利用氮素的响应情况。

主权项

一种基于荧光蛋白分布比例的土壤内可利用氮素的检测方法，其特征在于：对所用酿酒酵母菌株细胞中的自噬蛋白Atg8进行荧光标记；根据显微荧光照片或蛋白质印迹法(western‑blot)的结果，建立可利用氮素水平与酵母菌株细胞中荧光蛋白在液泡分布比例的关系；收集1g待测土壤，与10mL去离子水在摇床上100rpm振荡24h得到土壤水萃液，然后高速离心5min，取上清液，高温灭菌后备用；将自噬相关蛋白Atg8已被荧光蛋白标记的酵母细胞在50mL液体SD‑Ura培养基中培养至OD600≈1.0时，取30mL培养液经离心、无菌水洗涤后转入以无菌的上清液为唯一氮源的培养基中；培养一定时间后，计算荧光蛋白在液泡内的分布比例；并根据所建立的关系推算土壤内可利用氮素的量。