[发明专利]焦磷酸测序氯吡格雷个体化用药基因多态性检测试剂盒及其检测方法

摘要

焦磷酸测序氯吡格雷个体化用药基因多态性检测试剂盒及其检测方法，涉及氯吡格雷。所述试剂盒包括：全血基因组DNA提取试剂、多重PCR扩增引物、多重PCR扩增反应试剂、单链DNA分离和纯化试剂、焦磷酸测序引物、焦磷酸测序试剂和盒体。所述检测方法：人类全血基因组DNA提取；多重PCR扩增反应；单链DNA样本分离和纯化；焦磷酸测序与结果分析。主要通过检测影响氯吡格雷代谢导致个体疗效差异的最主要因素，即CYP2C19的重要基因多态性位点，具体为CYP2C19*2和CYP2C19*3，达到指导心脑血管疾病需要长期抗凝者根据个体基因类型合理选择氯吡格雷及其剂量进行治疗。

主权项

焦磷酸测序氯吡格雷个体化用药基因多态性检测试剂盒，其特征在于包括：（1）全血基因组DNA提取试剂：所述全血基因组DNA提取试剂来源于商品化的血液基因组提取试剂盒，成分有缓冲液GD、缓冲液GB、蛋白酶K、吸附柱CB3、漂洗液PW和洗脱缓冲液TB；（2）多重PCR扩增引物：所述多重PCR扩增引物包括：PCR引物1（Seq NO1）：CYP2C19*2(rs4244285)上游引物5’‑CAGAGCTTGGCATATTGTATCTA‑3’；PCR引物2（Seq NO2）：CYP2C19*2（rs4244285）下游引物5’‑TTCTTTTACTTTCTCCAAAATATCAC‑3’；PCR引物3（Seq NO3）：CYP2C19*3（rs4986893）上游引物5’‑ACCCTGTGATCCCACTTTCAT‑3’；PCR引物4（Seq NO4）：CYP2C19*3（rs4986893）下游引物5’‑ATGTACTTCAGGGCTTGGTCA‑3’；其中PCR引物2和PCR引物3的5’端均进行生物素标记；（3）多重PCR扩增反应试剂：所述多重PCR扩增反应试剂名为“2X PyroMark PCR Master Mix”，具体成分包括热启动Taq DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs、镁离子Mg²⁺、钠离子Na⁺以及扩增反应特异性增强剂Q‑Solution；（4）单链DNA分离和纯化试剂：所述单链DNA分离和纯化试剂，包括链霉亲和素琼脂糖、PyroMark结合缓冲液、PyroMark变性溶液和PyroMark洗脱缓冲液10X浓缩液；（5）焦磷酸测序引物：所述焦磷酸测序引物包括：测序引物1（Seq NO5）：CYP2C19*2（rs4244285）测序引物5’‑CCACTATCATTGATTATTTC‑3’；测序引物2（Seq NO6）：CYP2C19*3（rs4986893）测序引物5’‑AACTTGGCCTTACCTG‑3’；（6）焦磷酸测序试剂：所述焦磷酸测序试剂为DNA焦磷酸测序的常规试剂，包括PyroMark退火缓冲液、酶复合物、底物复合物和脱氧核糖核苷三磷酸复合物dNTP，其中dATP为人工修饰的α‑硫代脱氧腺苷三磷酸，其余脱氧胞苷三磷酸、脱氧鸟苷三磷酸、脱氧胸苷三磷酸未修饰；所述酶复合物为焦磷酸测序所有需要的酶，包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶、腺苷三磷酸双磷酸酶；所述底物复合物为腺苷‑5’‑磷酸硫酸酐；（7）盒体：全血基因组DNA提取试剂、多重PCR扩增引物、多重PCR扩增反应试剂、单链DNA分离和纯化试剂、焦磷酸测序引物、焦磷酸测序试剂设在盒体内。