[发明专利]一种临床检测EGFR基因突变的HRM方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于临床检测EGFR基因突变的HRM方法及试剂盒。通过提取待测样本DNA，使用如SEQIDNO.1-30所示的引物进行PCR扩增和HRM扫描分析；根据扫描分析结果判断EGFR基因突变类型，若HRM扫描无分型样本为阴性，HRM扫描分型样本为阳性。本发明的试剂盒包含上述引物、阴性对照、阳性对照、PCR试剂和LCGREEN等。该试剂盒全部引物能在同一温度下进行PCR反应，检测灵敏度高，特异性强，反应体系小，检测样本来源丰富，反应简便迅速试剂价格低廉，高通量。本发明检测全过程操作简单、省时、成本低，适用于临床肿瘤患者EGFR基因突变的快速检测，有助于指导临床个体化用药。

主权项

一种基于HRM技术的EGFR基因突变检测PCR试剂盒，其特征在于：包含引物对A、B、C、D和/或E；其中，引物对A用于检测EGFR基因18号外显子G719X突变，其为以下三对序列中的一对：A_F1：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT，A_R1：CCTTATACACCGTGCCGA；或A_F2：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCTG，A_R2：GTCCCTTATACACCGTGCC；或A_F3：CTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCT，A_R3：CTTATACACCGTGCCGAAC；引物对B用于检测EGFR基因19号外显子缺失突变：E746_A750del、E746_T751>I、E746_T751del、E746_S752>A、E746_S752>V、E746_S752>D、E746_T751>A、L747_A750>P、L747_T751>Q、L747_E749del、L747_T751del、L747_S752del、L747_A750>P、L747_T751>S、L747_T751del、L747_T751>P，其为以下三对序列中的一对：B_F1：AAGTTAAAATTCCCGTCGCTA，B_R1：TTCCTTGTTGGCTTTCGG；或B_F2：GTTAAAATTCCCGTCGCTATCA，B_R2：TTCCTTGTTGGCTTTCGG；或B_F3：AAATTCCCGTCGCTATCAAG，B_R3：AGGATTTCCTTGTTGGCT；引物对C用于检测EGFR基因20号外显子S768I突变，其为以下三对序列中的一对：C_F1：AGGAAGCCTACGTGATGG，C_R1：GTGGAGGTGAGGCAGAT；或C_F2：AGGAAGCCTACGTGATGG，C_R2：GGTGGAGGTGAGGCAGA；或C_F3：AGGAAGCCTACGTGATGG，C_R3：TGGAGGTGAGGCAGATG；引物对D用于检测EGFR基因20号外显子T790M突变，其为以下三对序列中的一对：D_F1：CACCGTGCAGCTCATCA，D_R1：GGACATAGTCCAGGAGGC；或D_F2：CACCGTGCAGCTCATCA，D_R2：CCGGACATAGTCCAGGAG；或D_F3：CACCGTGCAGCTCATCA，D_R3：CGGACATAGTCCAGGAGG；引物对E用于检测EGFR基因21号外显子L858R、L861Q突变，其为以下三对序列中的一对：E_F1：AGCATGTCAAGATCACAGATTT，E_R1：TGGTATTCTTTCTCTTCCGCAC；或E_F2：GCAGCATGTCAAGATCACAG，E_R2：TTCTTTCTCTTCCGCACCC；或E_F3：AAACACCGCAGCATGTC，E_R3：TTCTTTCTCTTCCGCACCC。