[发明专利]一种二化螟细胞的原代培养方法

摘要

本发明公开了一种二化螟细胞的原代培养方法。包括如下步骤：（1）将二化螟幼虫浸没在乙醇溶液中，表面消毒，清洗吹干虫体；（2）将虫体置于解剖蜡盘中，解剖二化螟，取出需要建立细胞系的组织或器官，清洗；（3）置于预先盛有细胞培养液的细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养，过夜后，待组织或器官贴壁后，再加入细胞培养液；（4）每隔几天吸出和换入细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；（5）把含有新增殖出的单个细胞，连同全部的细胞培养液吸出放入新培养瓶中，将两个培养瓶放入培养箱中培养至细胞系建立初步成功。本发明有助于在离体条件下研究二化螟，为其防治途径的研究和开发提供帮助。

主权项

一种二化螟细胞的原代培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）在无菌条件下，将二化螟幼虫浸没在70%或75%乙醇溶液中，进行表面消毒10～20分钟，用无菌蒸馏水清洗二化螟幼虫3～5次，用无菌滤纸吸干虫体或用吹风机吹干虫体；（2）将虫体置于用70%或75%乙醇消毒过的解剖蜡盘中，用解剖针将头尾固定，解剖二化螟，取出需要建立细胞系的组织或器官，将组织或器官放入盛有HBSS清洗液的培养皿中，清洗2～3次，然后再用细胞培养液清洗组织或器官；（3）将清洗过的组织或器官置于预先盛有0.5mL～1mL细胞培养液的T‑25cm²细胞培养瓶中，放入27℃无光照的细胞培养箱中培养，过夜后，待组织或器官贴壁后，再加入2mL细胞培养液，使组织块完全或大部分浸没在该培养液中；（4）每隔7～10天吸出和换入50%～70%量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；（5）把含有新增殖出的单个细胞，连同全部的细胞培养液吸出放入新培养瓶中，加入新的细胞细胞培养液，而原含有组织块的培养瓶中再加入同吸出量同样多的新的细胞细胞培养液，将两个培养瓶放入培养箱中培养至细胞系建立初步成功。