[发明专利]糖基化的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶

摘要

本发明的主题是糖基化的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶或其活性片段，其中根据成熟米曲霉FAD‑GDH野生型序列SEQ ID:2（野生型）的选自N2、N168和N346的至少一个天冬酰胺残基已被不适于糖基化的一个或更多个氨基酸取代，并从而分别消除或失活了该位置的潜在糖基化位点。源自成熟米曲霉FAD‑GDH野生型序列SEQ ID:2（野生型）的所述经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶或其功能性片段具有以下取代N2S、N168P、N168SP和N346D的一个或更多个。

主权项

糖基化的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶，选自：（a）糖基化的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶，其中根据成熟米曲霉(Aspergillus oryzae) FAD‑GDH野生型序列SEQ ID: 2（野生型）的选自N2、N168和N346的天冬酰胺残基的至少一个已被不适于糖基化的一个或更多个氨基酸取代，并从而分别消除或失活了该位置的潜在糖基化位点，和（b）糖基化的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶，其显示出与根据(a)的所述经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶大约80%或更高的氨基酸序列同一性，其中根据成熟米曲霉FAD‑GDH野生型序列SEQ ID: 2的选自N2、N168和N346的天冬酰胺残基的至少一个已被不适于糖基化的一个或更多个氨基酸取代，并从而分别消除或失活了该位置的潜在糖基化位点，和（c）根据(a)或(b)的经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶的活性片段条件是当与根据(a)的所述经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶相比时，在根据(b)的所述FAD‑GDH或者根据(c)的所述片段中，消除或失活所述潜在一个或更多个糖基化位点的所述一个或更多个取代被保留，以及条件是根据(b)的所述黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶或者根据(c)的所述片段显示出根据(a)的FAD‑GDH的酶活性的至少80％并显示出根据(a)的FAD‑GDH的干燥条件下温度稳定性的至少80％，其中“显示出干燥条件下的温度稳定性”的表述意指经冻干的所述经修饰的黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶（FAD‑GDH）自身和当包含在冻干组合物中时的残留活性，所述活性是在以下步骤之后进行计算并与未受压力的冻干物比较：1）冻干并将冻干酶在80℃下在分子筛(3A, MS551, Grace)存在下孵育8天。