[发明专利]抗HLA-G的单克隆抗体偶联免疫磁珠在肿瘤细胞分选中的应用

摘要

本发明公开了一种抗HLA‑G的单克隆抗体偶联免疫磁珠在肿瘤细胞分选中的应用。本发明还提供一种肿瘤细胞的分选方法，包括以下步骤：（1）抗HLA‑G的单克隆抗体偶联免疫磁珠得HLA‑G免疫磁珠；（2）将HLA‑G免疫磁珠混匀后加入到待分选的细胞液中，用免疫磁珠分离方法进行分离。本发明的有益效果是：（1）选用HLA‑G为分选肿瘤细胞标志物,HLA‑G为肿瘤特异的广谱性标志物,抗HLA‑G抗体偶联免疫磁珠后，特异性好，分选肿瘤效率高;（2）HLA‑G偶联免疫磁珠后敏感性和重复性较好，可以检出相关的肿瘤细胞。

主权项

1.一种肿瘤细胞的分选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）抗HLA‑G的单克隆抗体偶联免疫磁珠得HLA‑G免疫磁珠；所述抗HLA‑G的单克隆抗体为MEM‑G/2、MEM‑G/9或4H84；所述免疫磁珠的制备：取活化磁珠500μL，2mg/mL，以活性磁珠的质量计，加入40 μL 5mg/mL的抗HLA‑G的单克隆抗体，在1.5 mL微离心管中，于室温下圆周混合3h，1 mL PBS清洗三次，加入500μL 0.2mol/L 甘氨酸混合30min，封闭剩余的醛基；1 mL PBS清洗三次; 加入含有质量百分比2.5%BSA的PBS溶液混合30min，封闭非特异性的吸附位点，PBS清洗3次，加入500μL PBS缓冲液漩涡震荡，即得到浓度为2.0mg/mL的均匀的修饰有一抗的免疫磁珠；（2）将HLA‑G免疫磁珠混匀后加入到待分选的细胞液中，用免疫磁珠分离方法进行分离；具体方法是 ：取待分选的细胞液100µL，加入混匀的 HLA‑G 免疫磁珠 40µL，2mg/mL，28℃温箱中孵育 30 分钟后，在磁力架上利用免疫磁珠磁分离方法，将悬浮液弃之，用0.01M PBS，pH=7.4重复洗涤 2‑3 次，将悬浮液弃之，最后每管用 100µL PBS 重悬磁珠后，使用细胞计数板对肿瘤细胞数进行计数。