[发明专利]一种以五龄桑蚕为载体培养人工虫草的方法

摘要

一种以五龄桑蚕为载体培养人工虫草的方法，用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体五龄桑蚕上经人工培育而成五龄桑蚕虫草。包括以下步骤：(1)虫草菌菌株的筛选；(2)五龄桑蚕的准备；(3)菌悬液的制作；(4)接种；(5)子座的培育；(6)虫草的收集保存。本发明以家养五龄柞蚕为宿主，人工接种冬虫夏草菌株菌悬液，培育而成。接种成功率、接种后的僵化率达80％以上，子实体的长出率达85％以上，从接种到子实体的成熟约35-48天。

主权项

一种以蚕蛹为载体培养人工虫草的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)虫草菌菌株的筛选将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；2)宿主准备将家养柞蚕的茧去茧壳得活体蛹作为本发明的宿主，注意在去除茧时不破坏柞蚕的蛹；3)菌悬液的制作将筛选的虫草菌株接种于以蚕蛹粉末(去除表皮腊质)作为主要氮源制成的培养基平板上，置20℃下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4‑5天，用高速离散器，以10000r/min，匀浆1min既得菌悬液；4)接种前蚕蛹准备在无菌操作台内，将活体蛹用75％酒精消毒6‑9分钟左右，用无菌水冲洗5‑6次，晾干作宿主；5)接种在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述蚕蛹尾部或口器，按0.1‑0.15毫升/只注入菌液；6)子座的培育将处理后的蚕蛹放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，20℃下保护至蛹体僵硬；然后将培养僵硬的蛹体置于15‑25℃、空气相对湿度为85‑95％的自然光照的无菌培养室中培养；7)蚕蛹虫草的收集保存子座成熟后，放在60℃环境下烘干1‑5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。