[发明专利]一种β-葡萄糖苷酶交联聚集体催化合成红景天苷的工艺

摘要

本发明提供一种β-葡萄糖苷酶交联聚集体（简称：β-葡萄糖苷酶CLEAs）催化合成红景天苷的工艺，其中，在红景天苷合成阶段中：反应体系为1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐/仿水溶剂/1,4-二氧六环/缓冲溶液，仿水溶剂为乙酸乙酯，β-葡萄糖苷酶CLEAs的单位酶活为1.3~1.6U/ml，1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐与乙酸乙酯的体积和与1,4-二氧六环体积比为2:3~3:2，缓冲溶液的体积分数为12~18%；反应温度为48~52℃，反应5~9d。本发明能够大幅提高产物红景天苷的浓度，且可保持较高的β-葡萄糖苷酶CLEAs残余相对酶活。

主权项

一种β‑葡萄糖苷酶交联聚集体催化合成红景天苷的工艺，其特征在于：包括β‑葡萄糖苷酶交联聚集体的制备和红景天苷的合成两个阶段；β‑葡萄糖苷酶交联聚集体制备阶段，包括以下步骤：（1）将沉降剂加入β‑葡萄糖苷酶溶液中，振荡；（2）再加入戊二醛；（3）向混合液中加入硼氢化钠，振荡后，300~500rpm离心5~10min，收集沉淀，即为β‑葡萄糖苷酶交联聚集体；红景天苷的合成阶段，包括以下步骤：（4）将β‑D‑葡萄糖和对羟基苯乙醇溶解于含β‑葡萄糖苷酶交联聚集体的pH 为5.5~6.5的缓冲溶液中，再加入1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐、仿水溶剂和1,4‑二氧六环，形成1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐/仿水溶剂/1,4‑二氧六环/缓冲溶液反应体系，仿水溶剂为乙酸乙酯；（5）密封，保持温度为48~52℃，转速为245~255 rpm，反应5~9d，收集反应液；其中，步骤（4）的1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐/仿水溶剂/1,4‑二氧六环/缓冲溶液反应体系中，β‑D‑葡萄糖与对羟基苯乙醇的摩尔比为1:1~1:3，1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐的单位酶活为1.3~1.6U/ml ， 1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐与乙酸乙酯的体积和与1,4‑二氧六环的体积比为2:3~3:2，缓冲溶液的体积分数为12~18%。