[发明专利]狐狸尾兰组织培养方法

摘要

本发明公开了一种狐狸尾兰组织培养方法。本发明以狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；（1）液体培养基有利于类原球茎体短期的快速增殖，长期继代培养及保存类原球茎体时选用固体1/2MS培养基适宜；（2）在培养过程中，施加1mg/L的BA的效果更优一些，及可以增加类原球茎体的数目，又不会引起玻璃化的产生；（3）在培养基中加入1.0g/L维生素C可以有效抑制外植体的褐化。

主权项

一种狐狸尾兰组织培养方法，其特征在于：以狐狸尾兰未成熟种子作外植体,应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；具体步骤如下：1）无菌材料的获得用去离子水冲洗狐狸尾兰果实表面,然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次,再用无菌滤纸吸干水分,然后用解剖刀切开荚果,取出细小种子,轻轻将种子均匀散落到固体培养基上,每平板接种量为55粒种子；2）类原球茎体诱导把狐狸尾兰的种子分别接种于诱导培养基中,诱导原球茎(类原球茎体)的形成；培养基组成成分如下：VW+6‑BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；3）培养方式的筛选将诱导出的类原球茎体接种在1/2MS培养基上，分别采用固体培养和液体转动培养两种方式，4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数；其增殖倍数=新长出的类原球茎体/接种类原球茎体数；4）植物生长调节剂浓度的筛选以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的BA,KT,IBA NAA这四种生长调节剂,分别进行单因素试验，每处理4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数，计算方法同步骤3）；5）不同添加物对类原球茎体的褐化以1/2MS为基本培养基，在培养基中分别添加不同浓度的维生素C、活性炭AC和Na2S2O3；分别进行单因素试验，每处理3次重复，每个处理接种20个三角瓶；50天后观察并记录类原球茎体褐化和生长状况。