[发明专利]一种两栖动物非伤害性取样DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种两栖动物非伤害性样品采集DNA提取方法，通过剪去两栖动物蹼和/或趾并进行DNA提取。采用本发明的方法，提取快速而且所提取的DNA纯度高的两栖动物，对两栖动物没有伤害，不影响其进一步繁殖。

主权项

一种两栖动物非伤害性样品采集DNA提取方法，其特征在于包括步骤：(1)取活有尾目或无尾目两栖动物蹼和/或趾，剪碎后置于匀浆器中，加入匀浆液后冰浴研磨，研磨碎裂后置离心管中；(2)加入1％‑3％的β‑巯基乙醇溶液，混匀后60‑70℃水浴0.5‑1h，每隔3‑5分钟取出摇匀一次；(3)10000‑15000rpm离心3‑7min，离心后，移出上清于另一无菌离心管中，弃沉淀；(4)向上清中加入等体积的按体积比20‑30：1的氯仿：异戊醇的混合溶剂，混匀后，8000‑12000rpm离心5‑15min，取上清至另一无菌离心管中；(5)加入等体积的氯仿，混匀后8000‑12000rpm离心5‑15min，再取上清；(6)向上清中加入0.8‑1.2倍体积的2‑4M NaAC溶液，混匀后再加入1.5‑2.5倍体积预冷的无水乙醇，充分混匀后‑18℃以下放置30min以上；(7)10000‑15000rpm离心3‑7min，弃上清，所得DNA沉淀在室温下晾干；(8)用70‑80％的乙醇对DNA沉淀进行洗涤，干燥后沉淀溶于TE(是什么)中，加RNase A，37℃消化20‑40min，之后于‑20℃保存。