[发明专利]一种培养人羊膜间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种培养人羊膜间充质干细胞的方法。它包括如下步骤：取新鲜采集的人羊膜，清洗，放入羊膜保护液中2-8℃保存备用；取浸泡在羊膜保护液中不超过48小时的人羊膜，清洗，再依次置临用新配的青霉素钠和硫酸链霉素含量分别为2500-3500U/mL和3500-4500U/mL的氯化钠溶液和每毫升含30-50U注射用两性霉素B的甲硝唑注射液中进行浸洗，最后再清洗后置于一次性无菌培养皿中进行备用，然后分离，培养至细胞融合度达80-90%即得。本发明能避免动物血清及动物来源的试剂带来的潜在的危险性；48小时内均可用于羊膜间充质干细胞的培养，可操作性强；可大大减少因霉菌、厌氧菌污染造成的间充质干细胞分离培养不合格的几率。

主权项

 一种培养人羊膜间充质干细胞的方法，其特征在于：它包括如下步骤：    （1）取新鲜采集的人羊膜，清洗，放入羊膜保护液中2‑8℃保存备用，所述的羊膜保护液是在AIM‑V培养基中加入青霉素钠和硫酸链霉素得到的，其中青霉素钠和硫酸链霉素在羊膜保护液中的终浓度分别为100‑200 U/mL和100‑200 U /mL；   （2）取浸泡在羊膜保护液中不超过48小时的人羊膜，清洗，再依次置临用新配的青霉素钠和硫酸链霉素含量分别为2500‑3500 U /mL和3500‑4500 U /mL的氯化钠溶液和每毫升含30‑50 U两性霉素B的甲硝唑注射液中进行浸洗，最后再清洗后置于一次性无菌培养皿中进行备用；   （3）将无菌清洗过的人羊膜剪碎，加入AIM‑V培养基，置分离管中用全自动组织分离器进行分离，得羊膜组织匀浆；   （4）将全自动组织分离器处理好的羊膜组织匀浆进行离心，弃上清，收集下层，置于培养瓶中，然后向其中加入无血清培养基，置于36‑38℃、饱和湿度、体积分数为5%的CO2孵育箱中培养，至观察到瓶壁上形成多个大小不一、细胞数量密集的细胞岛时，则获得人羊膜间充质干细胞原代细胞混合液，然后经离心，即可获得人羊膜间充质干细胞原代细胞，再经传代培养至细胞融合度达80‑90%即得。