[发明专利]一种特异性纳米金DNA探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种特异性纳米金DNA探针的制备方法。该方法包括制备13nm纳米金颗粒AuNPs和将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上两大步骤，该特异性探针包括16SrRNA保守序列的互补序列、夹着16SrRNA保守序列的互补序列的互补的两段互补的发夹序列、以及夹着16SrRNA保守序列的互补序列和两段互补的发夹序列的荧光分子FAM及其淬灭基团BHQ1。使用该方法制备的特异性纳米金DNA探针在对尿液样本进行检测时，显示出了相较于尿液样本传统细菌检测方法，更加显著、快速、灵敏和特异性强的优点。

主权项

一种特异性纳米金DNA探针的制备方法，其特征在于：包括制备13nm纳米金颗粒AuNPs和将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上两个步骤；所述制备13nm纳米金颗粒AuNPs的步骤包括：步骤1‑1取9.8ml ddH2O加热煮沸；步骤1‑2加入200μL预冷的50mM HAuCl4并伴随晃动；步骤1‑3加入1ml预冷的38.8mM二水合柠檬酸三钠并伴随晃动；步骤1‑4煮沸10min并伴随晃动；步骤1‑5在室温超声30min；所述将特异性探针连接到13nm纳米金颗粒AuNPs上的步骤包括：步骤2‑1取30μL20μM的DNA探针加入到新鲜制备的30μL50mM三(2‑羧乙基)膦TCEP中，并取10μL0.5M NaOH调节pH到5；步骤2‑21h后加入10nM13nm AuNPs100μL；步骤2‑31h后加入50mM PBS33μL，并在室温下超声10s，之后在50℃下加热10min；步骤2‑4在室温下连接12h，之后加入40μL 50mM TCEP；步骤2‑51h后，加入0.01％SDS和8μL 3M NaCl，并在室温下超声10s，之后在50℃下加热10min；步骤2‑6经过6h后，再次加入8μL 3M NaCl，室温下超声10s，之后在50℃下加热10min；步骤2‑7重复步骤2‑6；步骤2‑8在室温下静置连接48h；所述特异性探针为5′‑/FAM/ACCG AGC CAT CGT TTA CGG CGT GGA CTA CCA GGG GCT CGGT/BHQ1/GAG GTC‑3′，其中5′‑CAT CGT TTA CGG CGT GGA CTA CCA GGG‑3′为16S rRNA保守序列的互补序列；5′‑GAG GTC‑3′为连接序列，所述特异性探针通过所述连接序列与13nm纳米金颗粒AuNPs相连。