[发明专利]一种单模块DNA文库及TALENs识别模块的连接方法

摘要

本发明公开了一种DNA文库及转录激活子样效应因子核酸酶质粒的构建方法。本发明还公开了一种转录激活子样效应因子连接单元库，所述DNA文库中包含了该TALE连接单元库中所有TALE连接单元。所述构建方法包括：根据目的基因的靶序列确定识别模块，从所述DNA文库中选取各识别模块对应的DNA片段；在同一体系内，采用二类限制性内切酶和DNA连接酶将各DNA片段中连接单元重组接入TALENs载体中；用消化线性DNA的酶进行消化处理，得到转录激活子样效应因子核酸酶质粒。与现有技术相比，采用本发明的DNA文库构建TALENs质粒，可一步将12-19个识别模块连接起来，速度快，效率高，操作简单，材料易于保存，成本低。

主权项

TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤包括： （1）根据所需连接的识别模块的顺序，从单元库中选择识别模块所对应的连接单元；所需连接的识别模块数量至少为1； 所述的单元库包括4组×k个连接单元；4组连接单元分别识别4种碱基，任意两组连接单元的粘性末端碱基序列一一对应相同； 所述的连接单元为识别单碱基识别模块及两端经二类限制性内切酶酶切形成的第一粘性末端和第二粘性末端；每组的连接单元包含相同的单碱基识别模块； 同一组的k个连接单元分为两部分，第一部分包含n个连接单元，第二部分包含m个连接单元；其中n≥2，m=0～n‑1； 第一部分所有连接单元两端的粘性末端碱基序列互不相同，对第一部分所有连接单元进行顺序编号，第i个连接单元的第二粘性末端与第i+1个连接单元的第一粘性末端互补，1≤i≤n‑1； 第二部分连接单元中任意两个连接单元至少一个粘性末端碱基序列不同，且第二部分连接单元中的任意一个连接单元的第一粘性末端与第一部分连接单元中第p个连接单元的第二粘性末端互补，第二粘性末端与第一部分连接单元中第q个连接单元的第一粘性末端互补，其中p≤n‑2，3≤q≤n，q‑p≥3； （2）利用DNA连接酶使连接单元依次连接。