[发明专利]一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

摘要

一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明涉及复配可控酶解成本低廉的末水条斑紫菜，得到α-葡萄糖苷酶抑制剂粗品。该粗品利用SPSepharoseHighPerformance阳离子交换层析、SephadexG-10凝胶层析和MonoQ阴离子交换层析分离纯化，所得对α-葡萄糖苷酶的高抑制活性部分(LGI)用反相高效液相及超高效液相色谱-质谱法分析其纯度和主要组成。LGI对α-葡萄糖苷酶的IC50值为97.36μg/mL，有较好的温度和pH稳定性：80℃水浴7h抑制活性保持在80%以上，在pH3~12的缓冲液中50℃保温2h抑制活性仍保持在87%以上。LGI分子量较小，稳定性好，成本低、应用安全，在医药和食品等领域有较广泛的应用前景。

主权项

一种从紫菜酶解产物中分离α‑葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于：步骤为：（1）α‑葡萄糖苷酶抑制剂的提取：以烘干至恒重的末水条斑紫菜粉末为底物，以pH7.0 Na2HPO4‑KH2PO4缓冲液为介质，底物与缓冲液的质量比为1:25～33，沸水浴热处理15 min；加入中性蛋白酶 E/S=8×104 U/g，50℃水解7 h，沸水浴灭酶15 min；调节pH8.5，加入固体氨肽酶 E/S=28 U/g和碱性蛋白酶 E/S=8×104 U/g，50℃水解3 h，沸水浴灭酶15 min；加入乙醇至终浓度为60%，室温静置过夜，8000 r/min离心10 min，上清液为含α‑葡萄糖苷酶抑制剂的混合物；（2）α‑葡萄糖苷酶抑制剂分离纯化：将含α‑葡萄糖苷酶抑制剂的混合物通过活性炭脱色，再将该活性炭脱色液依次经过SP Sepharose High Performance 阳离子交换层析、Sephadex G‑10凝胶层析和Mono Q 阴离子交换层析分离纯化后，得到α­葡萄糖苷酶抑制剂。