[发明专利]一种快速检测鱼Ⅱ型疱疹病毒的方法

摘要

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种快速检测鱼Ⅱ型疱疹病毒的方法，通过设计特定引物，对样本DNA进行LAMP反应，检测产物中是否含有扩增产物，从而确定样本中是否带有鱼Ⅱ型疱疹病毒。本发明提供的检测方法操作简便，只需一个恒温装置；检测周期短；检测结果灵敏度、正确度高；检测成本低；不仅可以用于病死鱼的病毒检测，还可用于检疫，具有重要的实施价值。

主权项

一种快速检测鱼Ⅱ型疱疹病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备检测样品：提取待检鱼组织中的总DNA，制备成模板DNA； (2) 环介导等温扩增：构建反应体系，以反应体系体积每25μL计，首先将内引物、外引物、甜菜碱、三磷酸脱氧核苷酸以及1μL步骤（1）制备的模板DNA加入到2.5μL10倍环介导等温扩增反应液中，再补充灭菌的超纯水到24μL；将反应物混合均匀后加热到95℃并保持3～5min，之后放入冰水中冷却10～20秒，再加入1μL的8U/μL的Bst DNA聚合酶，混合均匀后于61～65℃孵育30～60min，结束反应得到环介导等温扩增反应产物；其中内引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2各0.4μmol/L、外引物SEQ ID No.3和SEQ ID No.4各0.2μmol/L、甜菜碱1.5mol/L、三磷酸脱氧核苷酸0.1～0.4μmol/L；所述SEQ ID No.1：5’‑ACG TCC ACA GAC CGT CGT CGT TTT GTT CGG TCA CCC AGC TAC A‑3’；SEQ ID No.2：5’‑AAT GGG ATC AGG TCA AGT GCG CTT TCG CTG TAC TCT GGA TCC TCT‑3’；SEQ ID No.3：5’‑CAA CAC CTG GTG GCG ATA G‑3’；SEQ ID No.4：5’‑GTG CTA ACG TTG TGC TGA AC‑3’；(3) 检测结果判定：检测步骤（2）制备的反应产物，如果存在环介导等温扩增产物，则说明待检测鱼中有鱼Ⅱ型疱疹病毒。