[发明专利]用鸡胚传代细胞系和生物反应器培养新城疫病毒制备疫苗的方法

摘要

用鸡胚传代细胞系和生物反应器培养新城疫病毒制备疫苗的方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下步骤：1）种细胞的传代与培养；2）细胞适应毒种的繁殖；3）繁殖病毒用细胞的悬浮培养；4）病毒的培养与收获；5）鸡新城疫活疫苗制备；6）鸡新城疫灭活疫苗制备。采用该方法制备疫苗生产工艺简单且稳定、易操作，病毒含量高、批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量，生产出的鸡新城疫疫苗安全性好、免疫效力高，对新城疫强毒的攻击具有完全的免疫保护作用。

主权项

用鸡胚传代细胞系和生物反应器培养新城疫病毒制备疫苗的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1）种细胞的传代与培养：鸡胚传代细胞系DF‑1经胰酶细胞分散液消化传代，以细胞生长液继续培养，形成良好单层时，用于继续传代或接种病毒；2）细胞适应毒种的繁殖：取细胞适应的新城疫病毒毒种，接种于步骤1）中已长成单层的鸡胚传代细胞DF‑1中，置37～38℃继续培养，细胞病变率达75%以上时收获病毒悬液；3）繁殖病毒用细胞的悬浮培养：将步骤1）培养得到的种细胞悬浮液接种至灌注袋中，吸附后在生物反应器中加入细胞生长液进行悬浮培养；4）病毒的培养与收获：将步骤2）得到的细胞适应的新城疫病毒悬液接种于生物反应器中，换用维持液进行培养，接毒后实时监测糖耗情况，当糖耗接近0时，即开始收获病毒，收获病毒后，反复冻融灌注袋，收获全悬病毒液，经检验合格后置于‑20℃保存；5）鸡新城疫活疫苗制备：将步骤4）中得到的病毒液进行无菌检验、病毒含量测定，检验合格后经配苗、分装和冻干制成鸡新城疫活疫苗；6）鸡新城疫灭活疫苗制备：将步骤4）中得到的病毒液进行无菌检验、病毒含量测定，检验合格后进行甲醛灭活，灭活检验合格后进行乳化分装制成鸡新城疫灭活疫苗。