[发明专利]反转录聚合酶链反应检测转染后毛囊干细胞中VEGF165mRNA表达的方法

摘要

本发明涉及反转录聚合酶链反应检测转染后毛囊干细胞中VEGF165mRNA表达的方法，该方法包括以下的步骤：1）提取总RNA；2）毛囊干细胞RNA的逆转录体系；3）聚合酶链式反应；4）琼脂糖电泳：取扩增产物6μl上样，1.5%琼脂糖凝胶电泳后，在透射紫外光分析仪下摄影，并用激光光密度图象扫描仪扫描。本发明由于采用了上述的技术方案，实现了转染后毛囊干细胞中VEGF165mRNA的表达的检测。

主权项

1.反转录聚合酶链反应检测转染后毛囊干细胞中VEGF165mRNA表达的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤： 1）提取总RNA：将接种了毛囊干细胞的六孔培养板置于冰上，吸去培养液；每孔加预冷的Trizol试剂1ml，反复吹打裂解充分后移入EP管中；加入0.2ml氯仿，剧烈震荡混匀后放置2-3min；12000g,4℃离心15min；将上清液移入另一EP管中，约0.5ml，加等体积异丙醇，颠倒混匀，静置10min，12000g，4℃离心10min，弃上清；用0.5ml DEPC处理的75%酒精1ml洗涤沉淀，7500g，4℃离心5min；倾去酒精，倒置EP管，干燥至酒精挥发；加适量的DEPC处理的水-70℃冷冻备用； 2）毛囊干细胞RNA的逆转录体系 3）聚合酶链式反应 PCR引物VEGF165蛋白引物设计，Action作为对照； 30次循环（30cycles） 预变性（Hot start）-------------------------延伸（Extension） b)PCR反应体系 cDNA                     5.0μl 4）琼脂糖电泳：取扩增产物6μl上样，1.5%琼脂糖凝胶电泳后，在透射紫外光分析仪下摄影，并用激光光密度图象扫描仪扫描。