[发明专利]表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒LVTF及用途

摘要

本发明公开了一种表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒Lvtf及用途，该病毒Lvtf通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计，然后进行病毒LVTF的包装；该病毒LVTF具有SEQIDNO.1所示的基因序列。本发明的表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒LVTF不需要植入电极或光纤，无动物组织损伤性；组织穿透性强，可进行全脑范围内弥散性的刺激；时间、空间精确性高；能够在清醒自由运动中的动物中进行实时控制；细胞特异性高；因此在脑功能的研究和临床神经精神疾病的治疗中具有更高的应用价值。

主权项

一种表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒LVTF，其特征在于，该病毒LVTF通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计：TRPV1构建在CAG启动子下游，小鼠铁蛋白重链与小鼠铁蛋白轻链之间用一个可变链接区进行克隆，形成铁蛋白轻链‑连接体‑重链融合蛋白；铁蛋白轻链‑连接体‑重链融合蛋白构建位于TRPV1基因下游，在铁融合蛋白两侧各有一个2A自身裂解片段，从而实现TRPV1和铁融合蛋白的非融合共表达；EGFP报告基因克隆于铁融合蛋白下游；然后进行病毒LVTF的包装：慢病毒经过表达、包装和包埋带有目的片段的质粒后，转染到HEK293T细胞系中，使其充分表达并形成病毒颗粒；48小时后将培养基收集，用多步离心法进行病毒颗粒的纯化和浓缩，最后将病毒溶解在灭菌的PBS中，分装并储存于‑80℃备用，从而得到病毒LVTF；该病毒LVTF具有SEQ ID NO.1所示的基因序列。