[发明专利]一种对产ESBLs大肠杆菌产生耐药性影响的中药筛选方法

摘要

一种对产ESBLs大肠杆菌产生耐药性影响的中药筛选方法，在96孔板上采用微量试管二倍稀释法测定西药和拟筛选中药对产ESBLs大肠杆菌株的最小抑菌浓度，然后在培养基中加入亚抑菌浓度的中药再次使用微量试管二倍稀释法培养测定西药的最小抑菌浓度；利用连续传代法在加有同样亚抑菌浓度中药和同样浓度西药的培养基中传代培养，直至观测到的西药最小抑菌浓度与传代前相比变小4倍以上，即可判断为该中药对西药具有耐药逆转作用。本发明不受细菌被中药作用后是否仍能培养的限制，能够避免中药杀菌作用和耐药逆转作用的冲突，扩大了中药的筛选种类和范围，操作方便，能够准确快速地判断筛选结果。

主权项

一种对产ESBLs大肠杆菌产生耐药性影响的中药筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将耐药产ESBLs的大肠杆菌菌株进行分离，鉴定，并保存备用；（2）在第一批96孔板上，采用微量试管二倍稀释法，分别测定西药和拟筛选中药对步骤（1）得到的耐药产ESBLs的大肠杆菌菌株的最小抑菌浓度，从而得出西药的最小抑菌浓度和拟筛选中药的亚抑菌浓度；（3）根据步骤（2）所得的拟筛选中药的亚抑菌浓度，在培养基中加入亚抑菌浓度的拟筛选中药后，将该培养基加入第二批96孔板中，在第二批96孔板上再次采用微量试管二倍稀释法，测定西药对耐药产ESBLs的大肠杆菌菌株的最小抑菌浓度；（4）根据步骤（2）所得的拟筛选中药的亚抑菌浓度，在培养基中加入亚抑菌浓度的拟筛选中药后，将该培养基加入第三批96孔板中；按照步骤（3）中的第二批96孔板上所有长菌的孔所对应的西药浓度，在第三批96孔板中加入同样浓度的西药，再采用连续传代法，将第二批96孔板上所有长菌的孔上的菌传至加有同样浓度西药的第三批96孔板中进行传代，培养16h后观测西药的最小抑菌浓度；（5）按照步骤（4）所述的连续传代法，将第三批96孔板上所有长菌的孔上的菌传至加有同样亚抑菌浓度拟筛选中药和同样浓度西药的第四批96孔板中进行传代，培养16h后观测西药的最小抑菌浓度；依此传代，直至观测到的西药最小抑菌浓度与步骤（3）所得的西药最小抑菌浓度相比变小4倍以上，即判 断拟筛选中药对耐药产ESBLs的大肠杆菌菌株具有耐药逆转作用，即拟筛选中药和西药体外作用于耐药产ESBLs的大肠杆菌菌株具有较好的抑制作用。