[发明专利]一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法

摘要

本发明公开了一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法。该方法包括：制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒；分别以二者为固相进行多肽合成；向两组固相中加入K试剂。对于前者，K试剂可将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到肽磁纳米探针。对于后者，其可将多肽脱侧链保护并从该固相上切下，得到合成多肽。本方法在外磁场作用下可迅速脱离反应体系，为合成带来很大便利，并且能够简便精确地合成多肽，同时同步构建多肽磁纳米探针，以用于在体外和体内印证合成肽的生物学功能，也可用于大规模多肽库的建立，迅速筛选出功能肽。

主权项

一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，表面暴露氨基； （2）二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，通过HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略在其表面偶联rink amide linker； （3）分别以二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒为固相，利用HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略以Fmoc保护的氨基酸为单体，同步逐个接上氨基酸，进行多肽合成； （4）分别向两组固相中加入K试剂，所述的K试剂由三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2‑二巯基乙烷，苯酚以及水配制而成，优选的三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2‑二巯基乙烷，苯酚以及水的体积比为82.5：5：2.5：5：5；K试剂针对两种不同的固相起不同的作用： a对于偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒的固相，用于将合成的多肽脱侧链保护并从该固相上切下； b对于二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒的固相，用于将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到缀合多肽的磁纳米探针； （5）将上述步骤（4）a中从偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相上切下的多肽以乙醚沉降，收集产品并用MALDI‑TOF‑MS验证合成多肽的化学结构； （6）将上述步骤（4）b中由二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相得到的缀合多肽的磁纳米探针溶于PBS中，通过体外和体内实验印证合成肽是否具有生物学功能。