[发明专利]一种快速简便富集微量动物组织线粒体DNA的方法

摘要

本发明提供了一种快速简便富集微量动物组织线粒体DNA的方法，所述方法针对微量动物样品（最低10mg），通过碱性裂解法选择性沉淀核基因组DNA，经几步纯化后，达到快速简便富集线粒体DNA的目的。本发明的优势在于简便易行，实验耗时短，成本低廉，设备要求低，所富集的DNA可以直接作为后续利用PCR扩增进行分子鉴定的可靠模板，可用于小型鉴定实验室的微量动物样品预处理，特别适用于物种鉴定、个体分析以及古生物研究等。本发明可以适用于包括坚硬和柔软组织在内的几乎所有的微量动物组织。

主权项

一种快速简便富集微量动物组织线粒体DNA的方法，所述方法包括：（1）取动物组织样品，加入适量裂解缓冲液，置于1.5mL离心管中，漩涡振荡器混合1min，得混合液A；（2）混合液A加入2倍体积碱性裂解液，颠倒混合30sec，冰浴5min，得混合液B；（3）混合液B加入1/2体积的3M醋酸钾溶液，颠倒混合30sec，冰浴10min，得混合液C；（4）混合液C加入终浓度25μg/mL的RNase A，37℃温浴1hr后自然冷却至室温，12000×g以上离心10～15min，取上清液1移至新的1.5mL离心管；（5）上清液1中加入等体积的苯酚，室温混匀5～10min，12000×g以上离心10～15min，取上清液2移至新的1.5mL离心管；（6）上清液2中加入等体积的苯酚/氯仿体积比1:1的混合液，室温混匀5～10min，12000×g以上离心10～15min，取上清液3移至新的1.5mL离心管；（7）上清液3中加入等体积的氯仿，室温混匀5～10min，12000×g以上离心10～15min，取上清液4移至新的1.5mL离心管；（8）上清液4中加入1/10体积的3M醋酸钠和2倍体积无水乙醇，混匀，‑20℃放置30min沉淀DNA，取沉淀即为富集的线粒体DNA，溶于适量样品溶解液，‑20℃保存备用。