[发明专利]人体肠道微生态失衡与否快速评估试剂盒及测试方法

摘要

本发明涉及微生物生态学领域，旨在提供一种人体肠道微生态失衡与否快速评估试剂盒及测试方法。该试剂盒通过相对荧光定量PCR技术检测粪便中双歧杆菌与肠杆菌菌群水平比值，来评估肠道微生态失衡程度。方法如下：选定特异性最好扩增效率高的双歧杆菌与肠杆菌定量检测引物；计算双歧杆菌与肠杆菌DNA得率；微生物总DNA抽提；总DNA中双歧杆菌DNA和肠杆菌DNA相对定量检测；通过公式计算X值，根据X值评估肠道微生态失衡程度。本发明提供的试剂盒不但优化了双歧杆菌与肠杆菌定量检测条件而且具有快速，准确性好，灵敏度高的优点，可用于临床评价微生态调节剂的治疗效果，也可以指导临床消化系统功能紊乱症用药。

主权项

一种人体肠道微生态失衡与否快速评估试剂盒，其特征在于，包括以下成分：A液：2×PCR预混液：400μM dNTPs3M MgCl2，Tris‑HCl，KCl0.2％Triton X1000.1mg/ml BSA2U PyrobestTM DNA聚合酶20nM SYBR Green IB液：双歧杆菌引物：引物浓度分别为0.10μM双歧杆菌引物1：5′‑GCG TCC GCT GTG GGC3′双歧杆菌引物2：5′CTT CTC CGG CAT GGT GTT G3′C液：肠杆菌引物：引物浓度分别为0.10μM肠杆菌引物1：5′TGGGAGCGAAAATCCTG‑3′肠杆菌引物2：5′CAGTACAGGTAGACTTCTG‑3′D液：测定粪便微生物总DNA抽提试剂盒，双歧杆菌DNA得率的标准品：含有前述B液中双歧杆菌引物扩增出来的阳性产物的质粒10μl，其浓度为：每微升1010拷贝；E液：标准品释释液：TE缓冲液：TIRS‑HCl10mM，EDTA1mM，PH8.0。