[发明专利]核酸分析法

摘要

实施方式涉及对于样本的核酸分析法。核酸分析法包括：将样本用第1引物和第2引物进行扩增反应，使扩增反应产物与核酸探针反应，测定杂交的有无和/或量，确定样本中的目标核酸的有无和/或存在量。由第1引物和/或第2引物产生的扩增产物形成茎环结构体。通过检出与环结构的序列互补的核酸探针和扩增产物的杂交的有无和/或存在量，来对于样本进行核酸分析。

主权项

核酸分析法，是对于样本的核酸分析法，应被扩增的核酸包含第1模板核酸和第2模板核酸，所述第1模板核酸包含位于3’端的第1序列、与该第1序列的5’侧邻接的第1模板序列、和与该第1模板序列的5’侧邻接且位于5’端的第2序列，以及所述第2模板核酸是所述第1模板核酸的互补链，包含位于其3’端的第3序列、与该第3序列的5’侧邻接的第2模板序列、和与该第2模板序列的5’侧邻接且位于5’端的第4序列，该核酸分析法具备以下(a‑1)、(a‑2)、(b)、(c)、(d)和(e)的工序：(a‑1)准备用于扩增所述第1模板核酸和所述第2模板核酸的第1引物和第2引物，这里，所述第1引物包含作为所述第1序列的互补序列的S1序列、和与所述S1序列的5’端侧连接的S2序列，所述S2序列是作为所述第1模板序列的至少一部分的与所述第1序列的5’侧邻接或位于所述第1序列的5’侧的附近的序列，以及所述第2引物包含作为所述第3序列的互补序列的S3序列，并且与所述第1引物的延伸链对应的第1复制链，在其同一链上形成第1茎环结构体，该第1茎环结构体含有：包含第1茎部分的第1双链区域、和构成第1环部分的第1单链区域，所述第1双链区域包含来源于所述S2序列的第1茎部分和与该第1茎部分互补的来源于所述第1模板序列的互补序列的序列，所述构成第1环部分的第1单链区域包含所述S1序列，以及与所述第2引物的延伸链对应的第2复制链，在其同一链上形成第2茎环结构体，该第2茎环结构体含有：包含第2茎部分的第2双链区域、 和构成第2环部分的第2单链区域，所述第2双链区域包含来源于所述S2序列的互补序列的第2茎部分和与该第2茎部分互补的来源于所述第2模板序列的互补序列的序列，所述构成第2环部分的第2单链区域包含所述S1序列的互补序列，(a‑2)准备用于检出所述第1复制链和/或所述第2复制链的第1核酸探针和/或第2核酸探针，这里，所述第1核酸探针是所述第1复制链的所述构成第1环部分的第1单链区域的至少一部分的序列，所述第2核酸探针是所述第2复制链的所述构成第2环部分的第2单链区域的至少一部分的序列，(b)使用所述第1引物和第2引物来扩增所述样本，(c)使所述(b)中获得的扩增产物与所述第1核酸探针和/或第2核酸探针反应，(d)检出所述第1核酸探针和/或第2核酸探针与所述扩增产物的杂交的有无，和/或测定杂交量，(e)基于所述(d)的结果，确定所述样本中的所述目标核酸的有无，和/或确定存在量。