[发明专利]确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法、试剂盒以及引物

摘要

本发明公开了确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法、试剂盒以及引物。其中，该方法包括：利用第一引物和第二引物对核酸样本进行PCR扩增，并且在PCR扩增体系中加入核酸探针，核酸探针对应两个预定位点之间至少一部分对应的核酸序列；检测反应体系的发光，以便确定核酸样本的预定位点是否存在已知突变，第一引物的近3’端包含与两个预定位点之一已知突变对应的碱基，第二引物的近3’端包含与另一个已知突变对应的碱基，核酸探针具有：发光基团，发光基团形成于核酸探针的5’端，调节基团，调节基团形成于核酸探针的3’端，并且调节基团可以调节发光基团的发光。利用该方法能够有效地确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变。

主权项

一种确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法，其特征在于，包括：利用第一引物和第二引物对所述核酸样本进行PCR扩增，并且在所述PCR扩增体系中加入核酸探针，所述核酸探针对应两个预定位点之间至少一部分的核酸序列；以及检测反应体系的发光，以便确定所述核酸样本的预定位点是否存在已知突变，其中，所述第一引物的近3’端包含与所述两个预定位点之一已知突变对应的碱基，所述第二引物的近3’端包含与所述两个预定位点另一个已知突变对应的碱基，所述第一引物和第二引物之一作为正向引物，所述第一引物和所述第二引物的另一个作为反向引物，所述核酸探针具有：发光基团，所述发光基团形成于所述核酸探针的5’端，调节基团，所述调节基团形成于所述核酸探针的3’端，并且所述调节基团可以调节所述发光基团的发光，任选地，所述核酸样本来源于人体组织或细胞、重组核酸或转基因生物组织细胞，任选地，所述预定位点是SNP rs429358和rs7412，任选地，所述述第一引物的近3’端包含与rs429358的已知突变对应的碱基，所述第二引物的近3’端包含与rs7412的已知突变对应的碱基，任选地，所述第一引物的3’端碱基为与rs429358的已知突变对应的碱基，所述第二引物的3’端碱基为与rs7412的已知突变对应的碱基，任选地，所述第一引物作为正向引物，所述第二引物作为反向引物，任选地，所述第一引物为选自下列的至少之一：5’‑CGGACATGGAGGACGTGT‑3’5’‑GCGGACATGGAGGACGTGT‑3’5’‑CGCGGACATGGAGGACGTGT‑3’5’‑CGGACATGGAGGACGTGC‑3’5’‑GCGGACATGGAGGACGTGC‑3’5’‑CGCGGACATGGAGGACGTGC‑3’，所述第二引物为选自下列的至少之一：5’‑TGGTACACTGCCAGGCA‑3’5’‑CTGGTACACTGCCAGGCA‑3’5’‑CCTGGTACACTGCCAGGCA‑3’5’‑TGGTACACTGCCAGGCG‑3’5’‑CTGGTACACTGCCAGGCG‑3’5’‑CCTGGTACACTGCCAGGCG‑3’，任选地，所述核酸探针的长度为20个核苷酸。