[发明专利]一种石油降解菌剂的液态发酵方法无效
申请号: | 201210579573.5 | 申请日: | 2012-12-27 |
公开(公告)号: | CN103898000A | 公开(公告)日: | 2014-07-02 |
发明(设计)人: | 张海玲;杨琴;赵敏;李岩;张璇 | 申请(专利权)人: | 中国石油天然气股份有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C02F11/02;C12R1/01;C02F101/32 |
代理公司: | 北京市中实友知识产权代理有限责任公司 11013 | 代理人: | 谢小延 |
地址: | 100007 北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及一种石油降解菌剂的液态发酵方法;将琼氏不动杆菌接种在种子培养基中,经一级种子、二级种子、种子罐逐步扩大培养后,作为液体种子;将液体种子接入发酵培养基中,通气量为1:1,搅拌转速为100rpm,接种量为10%,罐压0.01-0.02MPa;发酵罐培养4小时起,每2小时进行取样,对样品进行染色,使用生物显微镜的油镜进行观察,同时使用细菌计数器对菌体密度进行检测;发酵8-14小时后可得到菌体密度大于1*109cfu的石油降解活菌制剂;本方法通过油脂类碳源和快速碳源相结合来提高菌体得率和提高菌株降油特性,相对于固体发酵来讲,发酵周期缩短了约60—84小时。 | ||
搜索关键词: | 一种 石油 降解 液态 发酵 方法 | ||
【主权项】:
一种石油降解菌剂的液体发酵生产方法,其特征:包括下述步骤:(1)将琼氏不动杆菌接种在种子培养基中,经一级种子、二级种子、种子罐逐步扩大培养后,作为液体种子;一级种子为固态斜面培养,培养条件为30°C,培养24小时;二级种子为液态摇床培养,培养条件为30°C,转速160rpm,培养10‑12小时;种子罐培养条件为搅拌转速80rpm,通气量1:1,罐压0.01‑0.02MPa,菌体密度达到1*107cfu后接入发酵罐;种子培养基水溶液组成为wt%:牛肉膏0.3,蛋白胨1,氯化钠0.5,pH为7,121℃灭菌20min;(2)将液体种子接入发酵培养基中,通气量为1:1,搅拌转速为100rpm,接种量为10%,罐压0.01‑0.02MPa;发酵培养基水溶液组成为wt%:葡萄糖0.3;豆油0.1;玉米浆2.5;牛肉膏0.35;磷酸二氢钾0.3;硫酸镁0.06;氯化钙0.003,pH7,121℃灭菌30min;(3)发酵罐培养4小时起,每2小时进行取样,对样品进行染色,使用生物显微镜的油镜进行观察,同时使用细菌计数器对菌体密度进行检测;(4)发酵8‑14小时后可得到菌体密度大于1*109cfu的石油降解活菌制剂。
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