[发明专利]一种提高集胞藻PCC6803脂肪酸含量的方法有效
| 申请号： | 201210529390.2 | 申请日： | 2012-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN103014037A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 毕玉平;陈高;何庆芳;张燕;李伟智;边斐;范仲学;单雷;彭振英;马德源 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院高新技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/63;C12N1/13;C12R1/89 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 王绪银 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提高集胞藻PCC6803脂肪酸含量的方法，步骤如下：（1）PCR扩增psbA2启动子、花生硫脂酶基因AhFatA和AhFatB1；（2）经融合PCR，Promotor+AhFatA和Promotor+AhFatB1；（3）经融合PCR扩增，制得Promotor+AhFatA+AhFatB1；（4）插入质粒中，制得重组载体；（5）经转化制得转基因集胞藻；（6）在30℃条件下培养，制得高脂肪酸含量的集胞藻PCC6803。本发明所述方法获得的转基因集胞藻在30℃混养条件下转AhFatA基因阳性集胞藻PCC6803的亚油酸含量明显增加，具有广阔应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 集胞藻 pcc6803 脂肪酸 含量 方法 | ||
【主权项】：
一种提高集胞藻PCC6803脂肪酸含量的方法，步骤如下：（1）PCR扩增集胞藻PCC 6803的psbA2启动子基因片段、集胞藻PCC 6803的psbA2ORF基因片段、Genbank登录号为GU324446的花生硫脂酶基因AhFatA和Genbank登录号为GU324447的花生硫脂酶基因AhFatB1；（2）将步骤（1）获得的psbA2启动子基因片段分别与步骤（1）制得的花生硫脂酶基因AhFatA和花生硫脂酶基因AhFatB1进行融合PCR扩增，分别制得基因片段Promotor+AhFatA和基因片段Promotor+AhFatB1；（3）将步骤（2）制得的基因片段Promotor+AhFatA和花生硫脂酶基因AhFatB1经融合PCR扩增，制得基因片段Promotor+AhFatA+AhFatB1；（4）将步骤（1）获得的psbA2ORF基因片段经SacII和SacI双酶切后与经相同酶切的pBluescript II SK plus T1T2连接，得到质粒pBluescript II SK plus T1T2‑downstream；分别对质粒pBluescript II SK plus T1T2‑downstream和质粒pUC4K进行BamHI单酶切，电泳后分别回收pBluescript II SK plus T1T2‑downstream载体片段和pUC4K中的npt片段，对载体片段去磷酸化后与npt片段连接，得到质粒pBluescript II SK plusT1T2‑npt‑downstream。（5）将步骤（2）制得的基因片段Promotor+AhFatA、基因片段Promotor+AhFatB1或者步骤（3）制得的基因片段Promotor+AhFatA+AhFatB1插入步骤（4）制得的质粒pBluescriptII SK plus T1T2‑npt‑downstream中，制得重组载体；（6）将步骤（5）制得的重组载体转化至集胞藻PCC6803中，制得转基因集胞藻；（7）将步骤（6）制得的转基因集胞藻在20～30℃条件下通气培养8～12天，制得高脂肪酸含量的集胞藻PCC6803。
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