[发明专利]一种提高水曲柳体细胞胚诱导率的方法

摘要

一种提高水曲柳体细胞胚诱导率的方法，它涉及一种提高体细胞胚诱导率的方法。它要解决现有水曲柳体细胞胚胎发生技术中存在体细胞胚诱导率低、外植体取材受季节和地点限制、外植体来源不足的问题。方法：一、取水曲柳成熟种子消毒后进行诱导培养，得胚性组织；二、胚性组织进行继代培养，即完成。本发明成本低、操作简单，使体细胞胚诱导率提高到70％以上，单个外植体上的体细胞胚数量达70个以上。本发明可以实现提高水曲柳体细胞胚诱导率、增加体细胞胚数量、提高繁殖效率的目标，而且本发明具有外植体来源广泛，包括新采集的成熟种子、经过各种方法贮藏不同时间的成熟种子均可作为外植体、外植体取材不受季节和地点限制的特点。

主权项

一种提高水曲柳体细胞胚诱导率的方法，其特征在于它按以下步骤实现：一、取水曲柳成熟种子进行消毒处理，然后剥离出合子胚，切取合子胚的单片子叶接种到含1.0～2.0mg/L苄基腺嘌呤、2.5～5.0mg/L生长素、200～700mg/L酸性水解酪蛋白、75～125g/L蔗糖和6～7g/L琼脂的诱导培养基中，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、无光照的条件下培养2～4周，得胚性组织；二、将胚性组织接种到含0～2.0mg/L苄基腺嘌呤、0～5.0mg/L生长素、200～700mg/L酸性水解酪蛋白、20～30g/L蔗糖和6～7g/L琼脂的继代培养基中，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、无光照的条件下继续培养2～4周，得各种不同发育时期的体细胞胚，即完成提高水曲柳体细胞胚诱导率的方法；其中步骤一中诱导培养基为MS1/2培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；步骤一中生长素为2，4‑二氯苯氧乙酸或萘乙酸；步骤二中继代培养基为MS1/2培养基或MS培养基，pH值均为5～6；步骤二中生长素为2，4‑二氯苯氧乙酸或萘乙酸。