[发明专利]同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法

摘要

本发明涉及一种同步检测TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA的方法，属植物保护领域。通过分别设计合成TBTV、TVDV、Sat-TBTV和TVDVaRNA正反向引物，CTAB法提取染病植物组织或传毒介体昆虫总RNA，采用一步法四重RT-PCR，达到对这4种病原物的同步快速检测。所设计的引物特异性强，能同时扩增出4种病原物。用CTAB法提取染病植物组织及传毒介体昆虫的总RNA，既能保证所提RNA的质量，也能降低检测成本。反转录与多重PCR一步完成，极大地节约了检测时间。本发明具有快速、高效、特异性强、灵敏度高和成本低廉等优点，能一次实现对与烟草丛顶病相关的4种病原物的同步检测，具有广阔的应用前景。

主权项

同步检测TBTV、TVDV、Sat‑TBTV和TVDVaRNA的方法，其特征在于，同步检测按照下面步骤进行：（1）引物设计合成：（a）分别设计合成检测TBTV、TVDV、Sat‑TBTV和TVDVaRNA的正向引物TBTVdF、TVDVdF、SatTBTVdF和TVDVaRNAdF，引物序列如下：TBTVdF：5’‑TACCACACCTAAACAGCGTTG‑3’，TVDVdF：5’‑GCAACAGCGAGACTTTCATCT‑3’，SatTBTVdF：5’‑TGTTGGCCGTGGGCAGCAA‑3’，TVDVaRNAdF：5’‑GCGTACTGCGGAAGTCTCAC‑3’，    （b）分别设计合成检测TBTV、TVDV、Sat‑TBTV和TVDVaRNA的反向引物TBTVdR、TVDVdR、SatTBTVdR和TVDVaRNAdR，引物序列如下：     TBTVdR：5’‑CTCATCTCCCGCTAAGTCAG‑3’，     TVDVdR：5’‑CRTTGCCTTTATAGAGCAGCC‑3’，其中，序列中的R=A或G，     SatTBTVdR：5’‑TTCGTATTTGGCTCCGTCGC‑3’，TVDVaRNAdR：5’‑TGTACTGGAGTGCTTCAACCG‑3’； （2）CTAB法提取染病植物组织或传毒介体昆虫的总核酸，作为RT‑PCR扩增模板； （3）一步法RT‑PCR扩增；（4）电泳检测；（5）检测结果分析：根据每对引物扩增片段大小与病毒的关系，观察感染TBTV、TVDVaRNA、Sat‑TBTV和TVDV的烟草材料或传毒介体昆虫中检测到的不同核酸带，判断发病烟草或传毒介体昆虫中具体感染的TBTV、TVDVaRNA、Sat‑TBTV和TVDV 病原物的种类。