[发明专利]一种多重点样、双层电泳检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳方法

摘要

一种多重点样、双层电泳检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳方法，它涉及一种检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳方法，本发明要解决现有微卫星DNA电泳检测时造成琼脂糖粉和电泳缓冲液大量浪费，以及EB的利用率低的问题。本发明的方法为：将同样面积的两块琼脂糖凝胶，平行放置在上下两层；依次对下层和上层凝胶点样、电泳，直至检测的扩增产物跑到凝胶底部时，停止电泳，然后进行凝胶成像检测。本发明的方法极大提高了琼脂糖凝胶和电泳缓冲液的利用率，节约了人力和成本。与单次点样比较，不需要重新制备凝胶，10cm长的一块凝胶可重复点样8次，节省成本8倍以上。从而实现了快速、高效检测植物SSR标记位点遗传变异。

主权项

一种多重点样、双层电泳检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳方法，其特征在于多重点样、双层电泳检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳方法是按照以下步骤进行的：一、利用微卫星分子标记对不同群体或群体中不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，得待检测扩增产物；二、制备同样面积的两块3%的琼脂糖凝胶，取其中一块3%的琼脂糖凝胶作为下层琼脂糖凝胶，另一块3%的琼脂糖凝胶平行放置在下层琼脂糖凝胶上，作为上层琼脂糖凝胶，将下层琼脂糖凝胶与上层琼脂糖凝胶放入电泳缓冲液中，备用；三、取步骤一中待检测扩增产物在下层琼脂糖凝胶上样后，进行电泳，待扩增产物与点样孔距离为1~2cm时，切断电源，停止电泳；四、在下层琼脂糖凝胶的凝胶孔继续上样，接通电源，继续进行电泳，待扩增产物与点样孔距离为1~2cm时，切断电源，停止电泳；然后在上层琼脂糖凝胶上样，接通电源，继续进行电泳，待扩增产物与点样孔距离为1~2cm时，切断电源，停止电泳；五、重复步骤四的操作，直至待检测的扩增产物跑到凝胶底部时，切断电源，停止电泳；六、采用紫外凝胶成像系统对电泳结果进行检测，即完成多重点样、双层电泳检测微卫星DNA的琼脂糖凝胶电泳。