[发明专利]检测沙丁胺醇的化学发光免疫检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种检测沙丁胺醇的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域。本发明的试剂盒由包被有沙丁胺醇-载体蛋白交联复合物的不透明白色酶标板、沙丁胺醇标准品、沙丁胺醇-过氧化物酶标记抗体、发光底物液、浓缩缓冲液组成。所述沙丁胺醇-载体蛋白交联复合物是将沙丁胺醇与载体蛋白通过混合酸酐法或直接活化蛋白法偶联得到，浓缩缓冲液含有吐温-20缓冲液。本发明的试剂盒具有快速简便、灵敏度高、检测成本低、重复性好、高通量等优点，可用于动物尿液、血样、组织及内脏等样品中沙丁胺醇的残留量检测。

主权项

一种检测沙丁胺醇的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于由以下组分组成：(1)96孔不透明白色酶标板，12条×8孔，包被有沙丁胺醇‑人血清白蛋白交联复合物，用铝膜真空密封包装；(2)沙丁胺醇标准品溶液6瓶，浓度分别为：0μg/L、0.04μg/L、0.12μg/L、0.36μg/L、1.08μg/L、3.24μg/L；(3)沙丁胺醇‑辣根过氧化物酶标记抗体溶液；(4)发光底物A液为鲁米诺及增强剂，发光底物B液为尿素过氧化氢；(5)100倍浓缩缓冲液：使用前稀释100倍成为工作浓度缓冲液，其稀释后的工作浓度缓冲液为0.05mol/L PBST缓冲液，pH7.4，含0.05％(v/v)Tween‑20；所述组分的制备：沙丁胺醇半抗原的准备：将沙丁胺醇酸化，在4℃无光低温环境中与亚硝酸钠作用，生成含重氮基正离子的中间体，重氮化的沙丁胺醇作为半抗原，用于后面合成免疫抗原与包被抗原；人血清白蛋白‑沙丁胺醇包被抗原的合成：将沙丁胺醇与人血清白蛋白采用重氮化法进行偶联得到免疫抗原；沙丁胺醇‑过氧化物酶标记抗体的制备：将上述免疫抗原注入Balb/C小鼠体内，经多次加强免疫后，使其产生抗体血清，取出免疫后小鼠的脾细胞，加入离心管中混匀，将上述脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，在含有HAT溶液的96孔培养板中进行CO2培养，筛选阳性孔，然后利用有限稀释法得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，取健康Balb/C小鼠，腹腔注射灭菌液体石蜡1mL，7d后向腹腔注射上述杂交瘤细胞悬液1mL，7d后采集腹水，加等量液体石蜡稀释，加入二氧化硅粉末混匀，离心得澄清腹水，澄清腹水用辛酸‑硫酸铵法进行纯化，再经透析得到纯化的沙丁胺醇单克隆抗体，沙丁胺醇单克隆抗体与辣根过氧化物酶偶联，从而得到沙丁胺醇‑过氧化物酶标记抗体；包被有沙丁胺醇‑HSA交联复合物的不透明白色酶标板制备：用缓冲液将沙丁胺醇‑HSA交联复合物稀释后用于包被不透明白色酶标板的检测孔，4℃过夜后用PBST缓冲液洗涤，然后加入200μL封闭液，所述封闭液含2％(w/v)HSA的PBST，37℃温育2h，倾去孔内液体，干燥后完成。