[发明专利]一种利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒及应用，所述试剂盒由磁珠悬浮液、基因提取液和磁架构成；所述基因提取液包括红细胞裂解液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K工作液、漂洗液1、漂洗液2、漂洗液3和洗脱液；本发明适于中大量全血基因组DNA的提取，操作简便，只需对红细胞进行简单预处理，即可对大体积的全血样本进行快速提取，1h内可完成操作，适合高通量、自动化提取；反应体系灵活，可根据样品体积作体系的相应调整；不使用苯酚、氯仿等有机溶剂，对操作人员安全无毒副作用；提取效率高，能够从2ml全血中提取20~ 60μgDNA，且片段完整。

主权项

一种利用磁珠提取全血基因组DNA的试剂盒，其特征在于所述试剂盒由磁珠悬浮液、基因提取液和磁架构成；所述磁珠悬浮液以氯化铁和氯化亚铁为磁性材料，在氮气和氢氧化钠的作用下，通过化学共沉淀形成磁性粒子，再将磁性粒子用硅酸钠修饰，水分散，获得所述磁珠悬浮液；所述基因提取液包括红细胞裂解液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K工作液、漂洗液1、漂洗液2、漂洗液3和洗脱液；所述红细胞裂解液终浓度组成为：100~200mmol/L氯化铵、5~20mmol/L钾盐，0.05~ 0.1mmol/L EDTA，溶剂为水，pH为7.0~8.0；所述细胞裂解液终浓度组成为：50 ~ 200mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐a、50~500mmol/L螯合剂、500 ~ 800mmol/L钠盐和质量终浓度0.5~5%十二磺基硫酸钠，溶剂为水，pH为7.0~8.0，所述螯合剂为EDTA；所述结合液终浓度组成为： 2~8mol/L离液盐a、0.2~2mol/L醋酸钠，溶剂为水，pH为4.0~6.0，所述离液盐a为盐酸胍、异硫氰酸胍、硫氰酸胍、碘化钠、碘化钾、高氯酸钠或氯化锂；所述漂洗液1终浓度组成为：1 ~ 4 mol/L的离子液盐b，0.1~2mol/L醋酸钠，体积终浓度20~30%的无水乙醇，溶剂是水，pH值4.0~ 6.0，所述离液盐b为盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钠或高氯酸钠；所述漂洗液2终浓度组成为：1~4 mol/L的离液盐c，0.1~2mol/L醋酸钠，体积终浓度50~70%的无水乙醇，pH值4.0~ 7.0，溶剂为水，所述离液盐c为盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钠或高氯酸钠；所述漂洗液3为体积浓度75%无水乙醇水溶液或无水乙醇；所述洗脱液终浓度组成为：10~20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，0.5mmol/L EDTA水溶液，pH9.0。