[发明专利]结球甘蓝组织培养方法

摘要

本发明属于组织培养，特别是指一种结球甘蓝组织培养方法。包括无菌苗的培养、诱导培养、增殖培养、生根培养、再生苗的移植等工艺步骤，本发明解决了现有技术存在的不利于结球甘蓝组培苗的继代培养、长期保存及生根移栽利用等问题，具有采用本方法在结球甘蓝诱导培养基上子叶可长出愈伤组织，胚轴可直接分化不定芽；组培苗增殖倍数3.8-4.6；组培苗生长势强，玻璃化苗数少，增殖率高；组培苗生根率可达100%等优点。

主权项

结球甘蓝组织培养方法，其特征在于，包括如下工艺步骤：A、无菌苗的培养：将去杂后选出的优质结球甘蓝种子消毒，将消毒后的种子接种于MS培养基中进行暗培养后制成无菌苗，按照48ml‑52ml培养基接种8‑10颗种子的接种量接种，培养温度22℃‑26℃，培养湿度70%‑80%，培养周期9‑12天；B、诱导培养：将暗培养后的无菌苗子叶切成4mm×4mm的块，将胚轴切成3.6‑4.2 mm，接种在诱导分化培养基上进行诱导培养，观察外植体在诱导培养过程中的变化和不定芽的诱导情况；诱导分化培养基的组成为：MS+6‑BA 2.0‑3.0mg/L，NAA 0.1‑0.2mg/L，蔗糖 25‑30g/L，琼脂 6.5‑7g/L，pH值=5.8；诱导培养的培养条件为：温度24℃‑26℃，光照强度1000‑2000Lx，光照时间12小时/天，培养湿度70%‑80%，培养周期25‑35天；C、增殖培养：将诱导的不定芽接种按照每瓶接种3‑4个的接种量接种于体积为 48ml‑52ml增殖培养基上进行增殖培养制成不定苗，25天继代1次，连续继代3次；增殖培养培养基的组成为：MS+6‑BA 1.0‑2.0mg/L，NAA 0.1‑0.2mg/L，蔗糖 25‑30g/L,琼脂 6.5‑7g/L,pH值=5.8；增殖培养的培养条件为：温度24℃‑26℃，光照强度1000‑2000Lx，光照时间12小时/天，培养湿度70%‑80%；D、生根培养：将不定苗分切后按照每瓶接种3‑4个的接种量接种于体积为48ml‑52ml生根培养基上进行生根培养，14天后观察生根情况；生根培养培养基的组成为：1/2MS+NAA 0.1‑0.2mg/L或1/2MS+IBA 0.2‑0.3mg/L ，蔗糖15‑20g/L，琼脂5.5‑6g/L，pH值=5.8；生根培养的培养条件为：温度24℃‑26℃，光照强度2200‑2500Lx，光照时间10‑12小时/天，培养湿度70%‑80%；E、再生苗的移植：当甘蓝组培苗产生根系并形成完整植株后，置于温室中炼苗，炼苗条件为：温度20℃‑25℃，3天后将三角瓶或组培瓶的瓶塞打开，7天后取出，洗去根部琼脂，将其栽植于培养介质中，湿度为80%‑90%，温度20℃‑23℃，14天后定植于土壤进行正常管理。